Umana Funzionale Fegato Conservazione e recupero mediante Subnormothermic macchina di perfusione

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di eseguire una macchina tematica subnormale, la perfusione del fegato umano per la conservazione, il recupero e la valutazione dell'organo. In un contesto di ricerca preclinica, ciò si ottiene preparando prima il fegato per il collegamento al dispositivo. Nella seconda fase, il sistema di perfusione della macchina viene innescato, il fegato viene collegato e la perfusione viene avviata nella fase finale.

Il fegato perfuso dalla macchina diventerà funzionalmente attivo in uno stato termico subnormale e produrrà bile. In definitiva, i campioni raccolti dal fegato durante la profusione possono essere analizzati per studiare il recupero metabolico e la funzione dell'organo. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi di conservazione esistenti come la profusione fredda e la profusione termica normale, è che la profusione meccanica tematica subnormale consente il recupero funzionale e la valutazione della vitalità del fegato, senza dover soddisfare le elevate esigenze metaboliche della perfusione a temperatura corporea.

Molti aspetti di questa tecnica richiedono esperienza o una dimostrazione per essere completati con successo. Ad esempio, la dimostrazione di come eseguire la preparazione del tavolo posteriore del fegato, che include la dissezione della vena arteriosa e del dotto valvolare, può essere utile per i ricercatori senza una precedente formazione chirurgica Al ricevimento del fegato, posizionare una ciotola d'organo riempita di ghiaccio su una superficie drappeggiata sterile e rimuovere il fegato dalla scatola di trasporto, lasciandolo per lo più immerso nel sacchetto di soluzione di conservazione a freddo. Successivamente, usa le forbici per balsamo Metzen per rivelare i vari rami lungo l'apporto arterioso al fegato dall'aorta all'arteria epatica corretta.

Quindi sezionare con cura il resto dell'arteria per evitare di recidere i vasi che irrorano il fegato senza tagliare o legare i rami che non hanno un'estremità visibile. Quando l'arteria è stata isolata, utilizzare suture di seta di dimensioni da zero a quattro zero per legare tutti i rami arteriosi che non irrorano il fegato. Legare e tagliare le arterie splenica e gastrica vicine alla loro origine sul tronco celiaco.

Taglia una macchia aortica attorno al tronco celiaco. Quindi utilizzare una cannula di profusione arteriosa per incannulare il tronco celiaco. Ora sezionare la vena porta libera, legando eventuali rami o punti di sutura nella vena e incannulare con una cannula di perfusione della vena porta.

Rimuovere sezioni del diaframma dalla vena cava sopraepatica senza tagliare la vena stessa. Quindi tagliare due campioni di tessuto lunghi due o tre millimetri dall'estremità del dotto biliare comune. I campioni devono essere maneggiati con delicatezza.

Congelare a scatto un campione e l'azoto liquido per la conservazione a una temperatura negativa di 80 gradi Celsius e conservare l'altro in formina tamponata al 10%. Quindi incannulare il dotto biliare comune con una cannula vascolare e collegare un tubo di drenaggio costituito da tubi di piccolo diametro. Quindi, lega il dotto cistico con una cravatta di seta zero.

Collegare il set di tubi di lavaggio alle sacche fredde di ghiaccio della soluzione di suonerie lattate e adescare il tubo per rimuovere l'aria. Impostare il regolatore di flusso sul tubo di lavaggio su un rivolo lento e occludere la vena porta all'ilo per rimuovere l'aria nel recipiente. Ora riempi la cannula in vena con una soluzione a filo per rimuovere l'aria dalla vena porta, facendo attenzione a non sollevare la sacca più di 20 centimetri oltre l'altezza del fegato per evitare un'eccessiva pressione sulla vena.

Quindi sciacquare il fegato con un totale di due litri di soluzione di ringer lattato a freddo ICEC. Durante il lavaggio, occludere brevemente la vena porta nel punto più basso per verificare la presenza di perdite, quindi ripetere il lavaggio per l'arteria epatica con un litro di soluzione come appena dimostrato mentre il fegato sta risciacquando, adescare il sistema di profusione con l'aggiunta di due litri di copuse otto a temperatura ambiente alla ciotola dell'organo e avviare il dispositivo per adescare il tubo. Impostare la temperatura a 21 gradi Celsius.

Quindi impostare una pressione di tre millimetri, mercurio sulla vena porta e 30 millimetri di mercurio sull'arteria epatica. Aprire il serbatoio del gas carbogen e impostarlo su un flusso di tre litri al minuto. Quindi, prelevare un campione di gas nel sangue dalla vena porta e dalle porte del campione di afflusso dell'arteria epatica ed eseguire i campioni nella macchina per l'analisi dei gas nel sangue secondo le istruzioni del produttore per confermare un'ossigenazione e un pH adeguati.

Utilizzare bicarbonato di sodio o acido cloridrico per correggere il pH, se necessario. Quindi, prima che il fegato sia collegato, raccogliere un campione di un millilitro di perfu otto volte come misura zero e conservarlo a una temperatura negativa di 80 gradi Celsius. Utilizzare una lama d'acciaio a filo singolo per tagliare due biopsie a cuneo di circa 250 milligrammi ciascuna dal fegato in questo momento.

Congelare a scatto un campione in azoto liquido per una conservazione a una temperatura negativa di 80 gradi Celsius e fissare l'altro in formalina tamponata al 10%. Prima di iniziare la profusione, pesare il fegato, quindi trasferire l'organo nella camera dell'organo del dispositivo e rimuovere l'aria dalle cannule. Appena dimostrato.

Quando le cannule sono fatte, collegare la vena porta e gli afflussi dell'arteria epatica alle cannule appropriate. Avviare la profusione Assicurarsi che il fegato sia immerso da perfuse otto, coprendo tutte le superfici asciutte, compresi i vasi di afflusso con una garza sterile bagnata. Per prevenire la disidratazione, lasciare scolare il tubo biliare in un contenitore di raccolta.

Fare attenzione che l'apertura del drenaggio biliare sia a livello del fegato o inferiore per consentire alla bile di scorrere liberamente. Una volta che il fegato è riscaldato a 21 gradi Celsius, puntare le velocità di flusso a 275-325 e da 50 a 100 millilitri al minuto per chilogrammo rispettivamente per la vena porta e l'arteria epatica. Durante la perfusione, prelevare campioni dal tessuto epatico perfuso e dalla bile a seconda dei casi.

Continuare la perfusione per tre ore, monitorando la pressione, il pH e l'ossigenazione e regolando il pH con bicarbonato di sodio se necessario. Al termine della perfusione, raccogliere i campioni finali, scollegare il fegato e rimuovere la cannula del dotto biliare. Infine, raccogliere due campioni di tessuto post-profusione del dotto biliare come appena dimostrato e scartare il fegato umano.

Seguendo le linee guida per lo smaltimento dei rischi biologici. Il flusso inizia basso a causa di una maggiore resistenza nel fegato freddo utilizzando una pressione di tre millimetri, mercurio sulla vena porta e 30 millimetri di mercurio sull'arteria epatica. I flussi target possono generalmente essere raggiunti una volta che il fegato si è riscaldato fino a 21 gradi Celsius dopo 60 minuti di perfusione. La misurazione frequente dell'otto perfuso mediante emogasanalisi è essenziale sia a scopo sperimentale che per il mantenimento di condizioni di perfusione adeguate.

Ad esempio, la pressione parziale dell'ossigeno disciolto dovrebbe essere maggiore di 700 millimetri di mercurio sull'afflusso sia della vena porta che dell'arteria epatica. Mentre la pressione di deflusso dell'ossigeno misurata nella vena cava dovrebbe generalmente diminuire con la perfusione più lunga, riflettendo un aumento dell'assorbimento di ossigeno. Le transaminasi epatiche possono anche essere misurate negli otto PERFU, ad esempio.

Un aumento di alanina, transaminasi o LT si osserva generalmente nei primi 30 minuti della perfusione con un ulteriore aumento minimo durante il resto della perfusione. Un'ulteriore valutazione della produzione di TP nei fegati perfusi meccanicamente rivela un aumento di 2,8 volte del contenuto di A TP nel fegato, che riflette uno stato energetico in recupero. Inoltre, l'analisi istologica h ed e non rivela ulteriori lesioni subite durante la procedura.

Seguire questa procedura consente un'analisi approfondita del fegato isolato, fornendo informazioni uniche sulla fisiologia e la patologia epatica. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come mantenere un fegato umano durante la perfusione della macchina suberica per facilitare la valutazione della sua funzione al di fuori del corpo.