/
/
SNARE-medierad fusion av Single proteoliposomer med tjudrad bilayers stöds i en mikroflödes Flow Cell övervakas av polariserat TIRF mikroskopi
È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
1Department of Cellular and Molecular Physiology,Yale University School of Medicine, 2Nanobiology Institute,Yale University, 3Department of Molecular Biophysics and Biochemistry,Yale University, 4Laboratoire de Neurophotonique, Université Paris Descartes, Faculté des Sciences Fondamentales et Biomédicales,Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS)
Capitoli
- 00:05Titolo
- 01:01Preparation of a PDMS Block to Form the Microfluidic Channel
- 03:17Formation of the Tethered Supported Bilayer
- 06:18Checking Bilayer Fluidity
- 07:06Introducing v-SUVs into the Microfluidic Channels
- 07:59Observing the Fusion of Single v-SUVs and the SBL
- 08:42Results: Docking and Fusion Events Described by Lipid and Content Release
- 10:26Conclusion
Här presenterar vi ett protokoll för att detektera enstaka, snara-medierad fusion händelser mellan liposomer och stöds dubbelskikt i mikroflödessystem kanaler med hjälp av polariserat TIRFM, med enda molekyl känslighet och ~ 15 ms tidsupplösning. Lipid och löslig lastfrigör kan detekteras samtidigt. Liposomstorlek, lipid diffusivitet, och fusion pore egenskaper mäts.
