Em vagalumes, a enzima luciferase converte um composto chamado luciferina em oxiluciferina, e produz luz ou “luminescência” como resultado. Essa reação requer energia derivada da ATP para prosseguir, de modo que os pesquisadores têm explorado a interação luciferase-luciferina para medir os níveis de ATP nas células. Dado o papel da ATP como moeda de energia da célula, o ensaio de bioluminescência da ATP pode fornecer insights sobre o metabolismo celular e a saúde geral das células.
Neste vídeo, o JoVE discute a respiração celular, revisando especificamente como o metabolismo da glicose resulta na produção de ATP. Isso é seguido por princípios por trás do ensaio de bioluminescência da ATP e um protocolo generalizado para esta técnica. Finalmente, um levantamento de como os pesquisadores estão usando atualmente o ensaio de bioluminescência da ATP para avaliar a viabilidade celular em uma variedade de condições experimentais.
Procedura
O ensaio de bioluminescência ATP é uma técnica comum usada para quantificar os níveis de ATP e detectar células vivas e metabolicamente ativas. ATP ou triptosfato de adenosina é a principal fonte de energia para todos os organismos vivos, e por “todos” queremos dizer ALL. No nível celular, a ATP é gerada através de um conjunto de processos metabólicos chamados respiração celular. Hoje, discutiremos brevemente os caminhos envolvidos na respiração celular. Em seguida, apresentaremos os princípios por tr…