Composition corporelle et l’analyse mise en cage métabolique in Mice Fed graisse haute

L’objectif de cette procédure est de recueillir des mesures de composition corporelle et métabolique chez la souris, telles que les pourcentages de graisse et de masse maigre et la dépense énergétique. Cette méthode peut aider à répondre à des questions importantes concernant le métabolisme des souris, telles que, quelle est la graisse de mes souris ? Et pourquoi mes souris sont-elles si grosses ?

Le principal avantage de ces techniques est qu’elles peuvent être réalisées chez des souris conscientes vivantes et peuvent donc être répétées de nombreuses fois tout au long d’une étude. Avant de scanner, les souris effectuent un test du système sur l’analyseur de composition corporelle une fois que l’appareil s’est réchauffé pendant quelques heures. Utilisez les normes appelées Échantillon d’essai du système d’huile de canola ou COÛTS.

Ouvrez le logiciel système, puis cliquez sur le bouton de la barre d’outils Test système ou en appuyant sur alt+Y sur le clavier. Avant de commencer le test, placez la bonne norme à l’intérieur du portique du système. Exécutez ensuite le test de diagnostic en suivant les invites du système si nécessaire.

Une fois que le système a réussi le test, procédez au diagnostic d’une souris. Placez maintenant la souris dans un support. Un support opaque rouge est le moins stressant.

Positionnez le support à un angle de 45 degrés et insérez la souris. Ensuite, soulevez lentement et soigneusement le support jusqu’à ce qu’il soit vertical. Ensuite, insérez un délimiteur dans le support pour limiter le mouvement de la souris.

Dans certaines circonstances, avec des souris extrêmement actives, il peut être nécessaire de sécuriser manuellement le délimiteur. Maintenant, dans le logiciel, sélectionnez un dossier dans lequel enregistrer les données et créez un nom de fichier. Ensuite, si nécessaire, réduisez la quantité de bruit aléatoire dans les mesures de graisse et de maigre en augmentant le nombre d’accumulations primaires du balayage.

Habituellement, cependant, les paramètres par défaut donneront le niveau de précision nécessaire. Si les données relatives à l’eau libre et à l’eau totale ne sont pas nécessaires, désactivez l’étape d’eau à l’aide de la bascule appropriée. Cela accélérera considérablement l’analyse.

Lancez maintenant l’analyse en sélectionnant Démarrer l’analyse ou en appuyant sur F5 sur le clavier. Entrez toutes les données pertinentes sur l’animal et appuyez sur OK ou F5 pour commencer le scan, qui prendra environ une minute. Après avoir collecté les données, renvoyez l’animal dans sa cage.

Nettoyez toujours en toute sécurité le support en acrylique entre les utilisations, par exemple avec de l’eau chaude savonneuse. Plus tard, une fois que tous les animaux ont été scannés, exportez les données pour une analyse et une compilation plus approfondies. Avant de commencer, assurez-vous que la machine est allumée depuis plus de deux heures.

Dans le système de surveillance des animaux, ouvrez le programme de contrôle et sélectionnez l’option utilitaire Oxymax dans le menu de l’outil pour lancer les pompes. Vérifiez ensuite le déshydratant et remplacez-le par un matériau frais et sec si nécessaire. Vérifiez également l’état du piège à ammoniac et de la chaux sodée et remplacez-le si nécessaire.

Ensuite, connectez le réservoir de gaz d’étalonnage au système à l’aide d’un régulateur et d’un tuyau. Ouvrez ensuite la vanne et produisez cinq à 10 PSI de gaz. Ensuite, dans le logiciel, sélectionnez Étalonnage dans le menu Outils et vérifiez que les débits d’échantillon et de référence sont précisément de 0,4 litre par minute.

Vérifiez ensuite que le capteur d’oxygène en zircone est chauffé à 725 degrés Celsius à un degré Celsius près. Ensuite, assurez-vous que le sécheur d’échantillons, le sécheur de référence et les pompes à air sont tous allumés et vérifiez que le gaz d’étalonnage est fixé et réglé. Procédez maintenant à l’étalonnage et, si nécessaire, ajustez légèrement la commande OFFSET à l’avant du capteur d’oxygène en zircone pour obtenir une valeur de rapport d’oxygène dans les limites acceptables.

Après avoir réussi à calibrer les capteurs d’oxygène et de dioxyde de carbone, détachez l’étalon de gaz et lisez les niveaux d’oxygène du gaz atmosphérique qui doivent être d’environ 20,92. Si vous mesurez l’apport alimentaire, envisagez d’utiliser un régime de souris en poudre. Chargez ensuite la trémie alimentaire en appuyant sur la plate-forme à ressort.

Ensuite, remplissez les bouteilles d’eau et organisez la nourriture. Maintenant, pesez et inspectez la santé des souris avant de procéder à l’assemblage des chambres. Placez ensuite la trémie alimentaire sur la balance.

Au-dessus, placez la chambre avec la plate-forme perforée. Placez ensuite délicatement la souris dans la chambre et fixez un couvercle à l’aide des clips avant et arrière. Fixez ensuite la bouteille d’eau pour terminer l’installation.

Installez maintenant la souris suivante et une fois que toutes les souris sont prêtes, vérifiez les couvercles de la chambre, les souris et l’eau. Pour exécuter l’expérience, sélectionnez Ouvrir le fichier expérimental dans le menu. Sélectionnez ensuite le modèle approprié.

Ensuite, sous Configuration, définissez les paramètres de l’expérience qui doivent être enregistrés et désélectionnez les chambres non utilisées. Sélectionnez ensuite l’emplacement d’enregistrement de l’expérience. Si l’apport alimentaire doit être mesuré, tarez la balance.

Lancez ensuite la capture des données en sélectionnant Exécuter dans le menu Expérience. Les premières 24 heures peuvent être utilisées comme phase d’acclamation et les 24 heures suivantes, plus pour l’analyse des données. Au moins deux fois par jour, vérifiez les animaux et la collecte de données.

Assurez-vous que chacun a accès à de la nourriture et de l’eau et recherchez des signes de détresse tels que le creusement du plancher perforé. Dans le logiciel, vérifiez la collecte de données en temps réel. Allez dans l’onglet Métabolique pour voir la consommation d’oxygène, le RER et la dépense énergétique.

O2IN doit être lu entre 20,90 et 20,94, CO2IN doit lire environ 0,04, RER doit lire entre 0,7 et un, le débit doit être constant de 0,5 à 0,6 litre par minute. Sous l’onglet Activité, les données en temps réel sur les ruptures de faisceau sont affichées. Sous les onglets Alimentation, des données en temps réel sur la consommation alimentaire sont affichées.

Pour terminer l’expérience, sélectionnez Arrêter dans le menu Expérience et exportez les résultats sous forme de fichiers CSV pour analyse. Ensuite, inspectez la santé des souris, pesez-les, puis renvoyez-les dans leurs cages d’origine. Dans les graphiques suivants, les carrés noirs représentent les souris nourries avec un régime riche en graisses et les cercles noirs représentent les souris nourries avec le régime alimentaire standard.

Les changements dans les paramètres de composition corporelle causés par une alimentation riche en graisses ont été mesurés par écho-IRM en utilisant les procédures décrites. Après une semaine de régime riche en graisses, il y a eu une prise de poids significative qui a augmenté de trois semaines. Le changement de poids pourrait clairement être attribué à un changement de masse grasse.

Ce n’était pas dû à un changement de la masse maigre, de la teneur en eau libre ou de la teneur totale en eau. Dans les graphiques à barres suivants, les colonnes blanches représentent les souris nourries à la nourriture et les colonnes noires représentent les souris nourries à haute teneur en graisses. Les mesures de V02, lorsqu’elles sont normalisées à la masse animale, n’ont montré aucun changement après la période de trois semaines.

De même, les mesures de la dépense énergétique, lorsqu’elles sont normalisées à la masse animale, n’ont montré aucun changement. L’activité physique, mesurée par des ruptures de poutre, variait selon le moment de la journée, mais était la même pour les deux groupes. L’apport alimentaire n’était pas différent lorsqu’il était normalisé en fonction de la masse corporelle.

Cette quantité est nettement plus importante que l’apport énergétique avec le régime riche en graisses. Une fois établie, car elle est non invasive, l’analyse de la composition corporelle peut être effectuée quotidiennement si nécessaire. Bien que les séances prolongées de surveillance métabolique animale puissent être considérées comme plus stressantes pour les souris en raison de l’isolement social, ces analyses peuvent également être effectuées de nombreuses fois dans un Les implications de ces techniques s’étendent à l’identification de cibles thérapeutiques pour l’obésité et les troubles métaboliques tels que le diabète de type 2 par le phénotypage métabolique minutieux des souris en ce qui concerne les manipulations génétiques ou les traitements médicamenteux.

En fin de compte, non seulement ces méthodes peuvent fournir des informations sur l’obésité, mais aussi sur d’autres affections telles que les modèles de masse de sarcopénie, de cachexie cancéreuse, de dystrophie musculaire ou de dystrophie widi.