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Un'analisi semplice, rapida e quantitativa per riparazione di misura di legami incrociati della DNA-proteina su plasmidi Transfected nelle cellule di mammifero
JoVE Journal
Genetica
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JoVE Journal Genetica
A Simple, Rapid, and Quantitative Assay to Measure Repair of DNA-protein Crosslinks on Plasmids Transfected into Mammalian Cells
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Un'analisi semplice, rapida e quantitativa per riparazione di misura di legami incrociati della DNA-proteina su plasmidi Transfected nelle cellule di mammifero

DOI:
10.3791/57413-v

•

11:58 min

•

March 05, 2018

•

,
1Department of Pharmacology,University of Minnesota

Capitoli

  • 00:04Titolo
  • 01:18Generation of DNA-protein Crosslink Containing Plasmid
  • 06:21Transfection into Mammalian Cells
  • 08:39SSPE-qPCR
  • 10:02Results: Use of Strand-specific Primer Extension Based q-PCR to Quantify the DNA-protein Crosslinks
  • 11:08Conclusion

Summary

Traduzione automatica

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L'obiettivo del presente protocollo è quello di quantificare la riparazione di definiti legami incrociati della DNA-proteina il DNA del plasmide. Lesi plasmidi sono transfected nelle linee cellulari di mammifero destinatario e basso peso molecolare raccolte a più punti di tempo post-transfezione. Cinetica di riparazione del DNA sono quantificati utilizzando primer specifici strand estensione seguita da qPCR.

Tags

DNA-protein CrosslinksPlasmid DNAMammalian CellsDNA RepairTrans-Pacific Primer Extension QPCR AssayAdductsPolymerase BlockingHouse Cell Reactivation8-oxoguanineT4 Polynucleotide KinasePrimer ExtensionPhenol-chloroform Extraction

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