È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Capitoli
- 00:04Titolo
- 00:41Cell Culturing
- 01:374tU Labeling with S. pombe as a Spike-in
- 03:20RNA Extraction and DNase Treatment
- 04:30Thiol-specific Biotinylation of Newly Synthesized RNA
- 06:05Purification of Newly Synthesized Fraction from Total and Unlabeled RNA Using Streptavidin-coated Magnetic Beads
- 07:18Results: Quantification of Newly Synthesized mRNA as a Proxy for RNA Polymerase II Activity
- 08:52Conclusion
Протокол, описанные здесь основан на количественное определение генома общесистемной вновь синтезированной мРНК, очищенного от дрожжевых клеток с 4-thiouracil. Этот метод позволяет измерять синтез мРНК, расцеплено от гниения мРНК и, таким образом, обеспечивает точное измерение II транскрипции РНК-полимеразы.
