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Extraction de la caféine, l’activité enzymatique et l’Expression génique de caféine Synthase de Suspensions de cellules végétales
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Caffeine Extraction, Enzymatic Activity and Gene Expression of Caffeine Synthase from Plant Cell Suspensions
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Extraction de la caféine, l’activité enzymatique et l’Expression génique de caféine Synthase de Suspensions de cellules végétales

DOI:
10.3791/58166-v

•

09:11 min

•

October 02, 2018

•

, , , , ,
1Unidad de Bioquímica y Biología Molecular de Plantas,Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2CONACYT, Facultad de Ingeniería Química, Campus de Ciencias Exactas e Ingeniería,Universidad Autónoma de Yucatán

Capitoli

  • 00:04Titolo
  • 00:28Caffeine Extraction in Cell Suspension of C. arabica L.
  • 00:55Conditions for the Assessment of Caffeine by Thin Layer Chromatography (TLC) Denistometry
  • 01:29Ribonucleic Acid (RNA) Isolation
  • 02:55Incubation of RNA Transcript with Deoxyribonuclease (DNase)
  • 03:59Complementary Deoxyribonucleic Acid (cDNA) Synthesis
  • 05:03Real-Time Quantitative PCR (qPCR) to Amplify the Gene CCS1
  • 05:43Total Protein of Cell Suspensions of C. arabica L.
  • 06:26Enzymatic Assay for Caffeine Synthase
  • 07:39Results: Enzymatic Activity of Caffeine Synthase Gene Evaluated via qPCR
  • 08:30Conclusion

Summary

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Ce protocole décrit une méthodologie efficace pour l’extraction et le dosage de la caféine dans des suspensions cellulaires de c. arabica L. et un processus d’expérimentation pour l’évaluation de l’activité enzymatique de synthase de caféine avec le niveau d’expression de le gène codant pour cette enzyme.

Tags

Keywords: Caffeine ExtractionEnzymatic ActivityGene ExpressionCaffeine SynthasePlant Cell SuspensionsAnalytical ChemistryBiochimicaBiotechnologyCaffeine BiosynthesisIn Vitro Plant ModelsAcetoneTLCDensitometryRNA IsolationChloroform Isoamyl AlcoholPhenolIsopropanolEthanolDEPC-treated WaterDNase

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