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Construction de plasmides CRISPR et détection de l’efficacité des knockouts dans les cellules mammifères grâce à un système de double luciferase reporter
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Capitoli
- 00:05Introduction
- 00:45Oligonucleotide Annealing and sgRNA/CRISPR Vector Digestion
- 01:51Identification of the Correct Recombinant Plasmids by PCR
- 02:42Dual-luciferase Detection
- 04:16Results: Design of sgRNA to Target Sheep DKK2 Exon 1
- 05:20Conclusion
Ici, nous présentons un protocole décrivant une méthode rationalisée pour la génération efficace de plasmides exprimant à la fois l’enzyme CRISPR et l’ARN guide unique associé (SGARN). La co-transfection des cellules mammifères avec ce vecteur sgRNA/CRISPR et un double vecteur de reporter luciferase qui examine la réparation de rupture à double brin permet d’évaluer l’efficacité des KNOCKOUT.
