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Bau von CRISPR Plasmiden und Nachweis von Knockout-Effizienz in Säugetierzellen durch ein Dual Luciferase Reporter System
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Capitoli
- 00:05Introduction
- 00:45Oligonucleotide Annealing and sgRNA/CRISPR Vector Digestion
- 01:51Identification of the Correct Recombinant Plasmids by PCR
- 02:42Dual-luciferase Detection
- 04:16Results: Design of sgRNA to Target Sheep DKK2 Exon 1
- 05:20Conclusion
Hier stellen wir ein Protokoll vor, das eine optimierte Methode zur effizienten Erzeugung von Plasmiden beschreibt, die sowohl das CRISPR-Enzym als auch die zugehörige Single Guide RNA (sgRNAs) exemittiert. Die Kotransfektion von Säugetierzellen mit diesem sgRNA/CRISPR-Vektor und einem dualen Luziferase-Reportervektor, der die Reparatur von Doppelstrang-Bruch untersucht, ermöglicht die Bewertung der Knockout-Effizienz.
