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CRISPR प्लाज्मिड्स का निर्माण और एक दोहरी लूसिफ़ेरेस रिपोर्टर सिस्टम के माध्यम से स्तनधारी कोशिकाओं में नॉकआउट दक्षता का पता लगाना
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Capitoli
- 00:05Introduction
- 00:45Oligonucleotide Annealing and sgRNA/CRISPR Vector Digestion
- 01:51Identification of the Correct Recombinant Plasmids by PCR
- 02:42Dual-luciferase Detection
- 04:16Results: Design of sgRNA to Target Sheep DKK2 Exon 1
- 05:20Conclusion
यहां, हम CRISPR एंजाइम और संबद्ध एकल गाइड आरएनए (SgRNAs) दोनों को व्यक्त करते हुए प्लाज्मिड की कुशल पीढ़ी के लिए एक सुव्यवस्थित विधि का वर्णन करते हुए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। इस sgRNA/CRISPR वेक्टर और एक दोहरी लूसिफ़ेरेस रिपोर्टर वेक्टर है कि डबल स्ट्रैंड तोड़ मरम्मत की जांच के साथ स्तनधारी कोशिकाओं के सह-ट्रांसफेक्शन नॉकआउट दक्षता के मूल्यांकन की अनुमति देता है ।
