/
/
Bygging av CRISPR Plasmids og påvisning av Knockout effektivitet i pattedyrceller gjennom en Dual Luciferase Reporter System
È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Capitoli
- 00:05Introduction
- 00:45Oligonucleotide Annealing and sgRNA/CRISPR Vector Digestion
- 01:51Identification of the Correct Recombinant Plasmids by PCR
- 02:42Dual-luciferase Detection
- 04:16Results: Design of sgRNA to Target Sheep DKK2 Exon 1
- 05:20Conclusion
Her presenterer vi en protokoll som beskriver en strømlinjeformet metode for effektiv generering av plasmider som uttrykker både CRISPR-enzymet og tilhørende enkeltguide RNA (sgRNAs). Samtidig transfection av pattedyrceller med denne sgRNA / CRISPR vektor og en dobbel luciferase reporter vektor som undersøker dobbel-strand pause reparasjon tillater evaluering av knockout effektivitet.
