/
/
Byggandet av CRISPR Plasmids och detektion av Knockout Effektivitet i däggdjursceller genom en Dual Luciferase Reporter System
È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Capitoli
- 00:05Introduction
- 00:45Oligonucleotide Annealing and sgRNA/CRISPR Vector Digestion
- 01:51Identification of the Correct Recombinant Plasmids by PCR
- 02:42Dual-luciferase Detection
- 04:16Results: Design of sgRNA to Target Sheep DKK2 Exon 1
- 05:20Conclusion
Här presenterar vi ett protokoll som beskriver en strömlinjeformad metod för effektiv generering av plasmider som uttrycker både CRISPR-enzymet och tillhörande single guide RNA (sgRNAs). Co-transfection av däggdjursceller med denna sgRNA/ CRISPR vektor och en dubbel luciferase reporter vektor som undersöker dubbel-strand bryta reparation möjliggör utvärdering av knockout effektivitet.
