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Espressione, purificazione, cristallizzazione e saggi enzimatici di Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-Containing Proteins
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1Research Institute for Biomedical Aging Research,University of Innsbruck Austria, 2Center for Molecular Biosciences Innsbruck (CMBI),University of Innsbruck Austria, 3Division of Genetic Epidemiology,Medical University of Innsbruck Austria, 4Faculty of Chemistry, Department of Organic Chemistry,University of Vienna Austria
Capitoli
- 00:04Titolo
- 01:12Expression of FAHD Proteins in Competent E. coli
- 03:44Lysis of Bacterial Pellets and Filtration of Debris
- 04:33Purification of His-tagged FAHD Proteins using Ni-NTA Affinity Chromatography
- 05:59Purification of FAHD Proteins via Ion Exchange Chromatography
- 06:35Basic FAHD Activity Assays with Substrates Oxaloacetate and Acetylpyruvate
- 07:53Results: Expression and Purification of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-containing Proteins
- 09:19Conclusion
L'espressione e la purificazione delle proteine contenenti idrolasi fumarylacetoacetate sono descritte con esempi (espressione in E. coli, FPLC). Le proteine purificate sono utilizzate per la cristallizzazione e la produzione di anticorpi e impiegate per i saggi enzimatici. Vengono presentati alcuni saggi fotometrici per mostrare la multifunzionalità di FAHD1 come oxaloacetate decarboxylase e idrolasi acylpyruvate.
