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フマリアルセトーアセテートヒドロラーゼドメイン含有タンパク質の発現、精製、結晶化、酵素アッセイ
JoVE Journal
Biochimica
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JoVE Journal Biochimica
Expression, Purification, Crystallization, and Enzyme Assays of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-Containing Proteins
DOI:

10:21 min

June 20, 2019

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Capitoli

  • 00:04Titolo
  • 01:12Expression of FAHD Proteins in Competent E. coli
  • 03:44Lysis of Bacterial Pellets and Filtration of Debris
  • 04:33Purification of His-tagged FAHD Proteins using Ni-NTA Affinity Chromatography
  • 05:59Purification of FAHD Proteins via Ion Exchange Chromatography
  • 06:35Basic FAHD Activity Assays with Substrates Oxaloacetate and Acetylpyruvate
  • 07:53Results: Expression and Purification of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-containing Proteins
  • 09:19Conclusion

Summary

Traduzione automatica

ヒドロラーゼドメイン含有タンパク質のフマリアルセトー酢酸水素の発現および精製は、例(大腸菌、FPLCにおける発現)と記載されている。精製タンパク質は、結晶化および抗体産生に使用され、酵素アッセイに使用されます。選択されたフォトメトリックアッセイは、オキサロアセテートデカルボキシラーゼおよびアシルピルベートヒドロラーゼとしてFAHD1の多機能性を表示するために提示される。

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