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Expressão, purificação, cristalização e ensaios enzimáticos de proteínas contendo domínio de Fumarilacetoacetato de hidrolase
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Expression, Purification, Crystallization, and Enzyme Assays of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-Containing Proteins

Expressão, purificação, cristalização e ensaios enzimáticos de proteínas contendo domínio de Fumarilacetoacetato de hidrolase

DOI:
10.3791/59729-v

•

10:21 min

•

June 20, 2019

•

, , , , , , , ,
1Research Institute for Biomedical Aging Research,University of Innsbruck Austria, 2Center for Molecular Biosciences Innsbruck (CMBI),University of Innsbruck Austria, 3Division of Genetic Epidemiology,Medical University of Innsbruck Austria, 4Faculty of Chemistry, Department of Organic Chemistry,University of Vienna Austria

Capitoli

  • 00:04Titolo
  • 01:12Expression of FAHD Proteins in Competent E. coli
  • 03:44Lysis of Bacterial Pellets and Filtration of Debris
  • 04:33Purification of His-tagged FAHD Proteins using Ni-NTA Affinity Chromatography
  • 05:59Purification of FAHD Proteins via Ion Exchange Chromatography
  • 06:35Basic FAHD Activity Assays with Substrates Oxaloacetate and Acetylpyruvate
  • 07:53Results: Expression and Purification of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-containing Proteins
  • 09:19Conclusion

Summary

Traduzione automatica

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Expressão e purificação de proteínas contendo domínio de fumarilacetoacetato hidrolase é descrita com exemplos (expressão em E. coli, FPLC). As proteínas purificadas são utilizadas para a cristalização e produção de anticorpos e empregadas para ensaios enzimáticos. Os ensaios fotométricos selecionados são apresentados para exibir a multifuncionalidade de FAHD1 como oxaloacetato descarboxilase e acylpyruvate hydrolase.

Tags

Keywords: ExpressionPurificationCrystallizationEnzyme AssaysFumarylacetoacetate HydrolaseFHD ProteinTCA CycleEnergy MetabolismMitochondriaCellular SenescenceIPTG InductionAffinity ChromatographyFPLCBL21-DE3 PLysS E. ColiLB AgarNZCYM Medium

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