È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
1Department of Nephrology,University of Duisburg-Essen, University Hospital Essen, 2Institute for Virology,University of Duisburg-Essen, University Hospital Essen, 3Center for Translational Medicine, Medical Department I, Marien Hospital Herne,University Hospital of the Ruhr-University of Bochum, 4Department of Infectious Diseases, University of Duisburg-Essen,University Hospital Essen Hufelandstr
Capitoli
- 00:00Titolo
- 01:15Collection of Blood and or Urine Samples and Isolation of BKPyV-DNA
- 02:11Amplification and Sequencing of the Non-coding Control Region (NCCR)
- 03:37Cloning of the Non-coding Control Region (NCCR) into the Dual Fluorescence Reporter
- 05:26Transient Transfection of HEK293T Cells with the Dual Fluorescence Reporter Plasmid and Treatment with Potential Antiviral Agents
- 07:23Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry
- 09:22Results and Data Interpretation
- 11:26Conclusion
В этой рукописи представлен протокол для выполнения FACS-измерения транскрипционной активности BK-полиомавируса с помощью клеток HEK293T, трансфицированных двунаправленным репортером плазмидом, выражающим tdTomato и eGFP. Этот метод позволяет дополнительно количественно определить влияние новых соединений на вирусную транскрипцию.
