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Discriminação e mapeamento das transcrições primárias e processadas em Mitocídrias de milho usando uma estratégia circular RT-PCR-based
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Discrimintion and Mapping of the Primary and Processed Transcripts in Maize Mitochondrion Using a Circular RT-PCR-based Strategy

Discriminação e mapeamento das transcrições primárias e processadas em Mitocídrias de milho usando uma estratégia circular RT-PCR-based

DOI:
10.3791/60019-v

•

07:26 min

•

July 29, 2019

•

, , , , , , ,
1State Key Laboratory of Conservation and Utilization of Subtropical Agro-Bioresources,South China Agricultural University, 2Guangdong Provincial Key Laboratory of Plant Molecular Breeding, College of Agriculture,South China Agricultural University

Capitoli

  • 00:04Titolo
  • 00:39Preparation of Crude Mitochondrion from Maize Developing Kernels
  • 01:45RNA 5’ Polyphosphatase Treatment and Circularization
  • 02:33Reverse Transcription and Normalization
  • 03:30PCR Amplification and Determination of Transcript Termini
  • 04:34Verification of the cRT-PCR Mapping Results by RNA Gel Blot Hybridization
  • 05:00Discrimination of Primary and Processed 5’ Ends
  • 05:26Determination of Maize mRNA Termini Using the Circular RT-PCR-based Strategy
  • 07:05Conclusion

Summary

Traduzione automatica

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Nós apresentamos uma estratégia RT-PCR-baseada circular combinando o RT-PCR circular, o RT-PCR quantitativo, o RNA 5 ' polyphosphatase-Treatment, e o borrão do Norte. Este protocolo inclui um passo de normalização para minimizar a influência do trifosfato 5 ' instável, e é adequado para discriminar e mapear as transcrições primárias e processadas estavelmente acumuladas em mitocódrias de milho.

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Keywords: MitochondrionMaizePrimary TranscriptsProcessed TranscriptsCircular RT-PCRRNA NormalizationFive Prime Polyphosphatase TreatmentRNA ExtractionReverse TranscriptionPCR

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