È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Capitoli
- 00:04Titolo
- 00:29Insertion of Peptide Coding Sequencing Sequence in pBAD BirA-eCPX-AP
- 01:32Generation of a BirA Library
- 03:16Selection of Bacteria Expressing Biotinylated Peptide
- 07:18Quantification of Enrichment
- 08:26Results: Model Selection with pBAD-BirA-eCPX-AP and pBAD-BirA-eCPX-AP(K10A)
- 10:00Conclusion
Här presenterar vi en metod att välja för nya varianter av E. coli biotin-proteinligase bira att biotinylates en specifik mål peptid. Protokollet beskriver byggandet av en Plasmid för bakteriell visning av målet peptid, generering av ett BirA bibliotek, urval och karakterisering av BirA varianter.
