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Dinamica di oligomerizzazione dei recettori delle superfici cellulari nelle cellule viventi mediante microscopia a fluorescenza totale di riflessione interna combinata con l'analisi del numero e della luminosità
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Oligomerization Dynamics of Cell Surface Receptors in Living Cells by Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy Combined with Number and Brightness Analysis
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Dinamica di oligomerizzazione dei recettori delle superfici cellulari nelle cellule viventi mediante microscopia a fluorescenza totale di riflessione interna combinata con l'analisi del numero e della luminosità

DOI:
10.3791/60398-v

•

10:43 min

•

November 06, 2019

•

, , , ,
1Unit of Microscopy and Dynamic Imaging,Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares (CNIC), Madrid, Spain, 2Centro di Imaging Sperimentale,Ospedale San Raffaele, Milan, Italy, 3Unit of Gynecological Oncology Research,European Institute of Oncology IRCCS, Milan, Italy

Capitoli

  • 00:04Titolo
  • 01:48Sample Preparation
  • 02:38TIRF Imaging: Alignment of the Laser Line and Optimization of TIRF Illumination
  • 04:05TIRF Imaging: Capture of the Time Series
  • 05:46Number & Brightness (N&B): Quality Check of the Time Series
  • 06:34Number & Brightness (N&B): Computation of the B-values in Selected Region-of-interest (ROI)
  • 08:19Results: N&B Analysis and Kinetics of FGFR1 Oligomerization
  • 09:42Conclusion

Summary

Traduzione automatica

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Descriviamo un approccio di imaging per la determinazione dello stato oligomerico oligomerico medio degli oligomeri mEGFP-tagged-receptor indotti dal legame del ligando nella membrana plasmatica delle cellule viventi. Il protocollo si basa sulla microscopia TIRF (Total Internal Reflection Fluorescence) combinata con l'analisi di Number and Brightness (N&B).

Tags

OligomerizationCell Surface ReceptorsTIRF MicroscopyNumber And Brightness AnalysisReceptor ClusteringFGFR1Fluorescence FluctuationLive Cell ImagingProtein OligomerizationCell Signaling

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