Name: Monitoring PD-1-Blocking Antilichamen gebonden aan T-cellen afgeleid van een druppel perifeer bloed (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Leer een flowcytometrie-assay voor het evalueren van PD-1-blokkerende antilichamen gebonden aan T-cellen met slechts een druppel perifeer bloed. Deze methode identificeert immuuncelsubsets voor kankerimmunotherapie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door subsidies aan S.K. van de Japan Society for the Promotion of Science KAKENHI (JP17K16045) en het Japan Agency for Medical Research and Development (JP18cm0106335 en 19cm0106310).

De bemonstering werd uitgevoerd tijdens routineklinische procedures. Alle menselijke monsters werden verkregen nadat geïnformeerde toestemming werd verstrekt door de proefpersonen, in overeenstemming met de Verklaring van Helsinki en met de goedkeuring van de ethische toetsingscommissie van de Graduate School of Medicine, Osaka University, Japan (15383 en 752).
1. Volkoren monster voorbereiding en kleuring
<ol><li>Verzamel bloedmonsters in bloedafnamebuizen met ethyleendiamine tetra-azijnzuur (EDTA). OPMERKING: Bloedafname kan worden uitgevoerd met behulp van een gewone naald of een bloedlancet.</li>
	<li>Breng 20 μL volbloedmonsters over naar 5 mL round-bottom polystyreenstroomcytometriebuizen. OPMERKING: Om de niet-specifieke binding van cellen aan buizen te verminderen, wordt 1 mL van 2% foetaal runderserum (FBS) in fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) toegevoegd in buizen en gedurende 10 s vortexed voordat ze op monsters worden aangebracht.</li>
	<li>Voeg 20 μL van 2% FBS toe aan PBS.</li>
	<li>Voeg 10 μL menselijk-specifieke FcR-blokkeringsreatoeër toe. Meng goed en incubeer gedurende 15 min bij kamertemperatuur.</li>
	<li>Voeg 500 μL rode bloedcellysebuffer toe. Meng goed en incubeer gedurende 10 min bij kamertemperatuur.</li>
	<li>Voeg 4 mL van 2% FBS toe in PBS en draai cellen bij 400 x g (1.500 tpm) voor 5 min bij 4 °C. Verwijder supernatant door aspiratie.</li>
	<li>Herhaal het was- en aspiratieproces beschreven in stap 1.6.</li>
	<li>Cellen opnieuw opschorten in 100 μL van 2% FBS in PBS en verdelen in twee buizen van elk 50 μL.</li>
	<li>Voeg antilichamen van oppervlaktemarkeringtoe(tabel 1 )toe . Meng goed en incubeer gedurende 20 min bij kamertemperatuur in het donker. OPMERKING: Bij het profileren van de T-cel immuunstatus, kan het aantal markers worden verhoogd op basis van de stroom cytometrie machine kwaliteit.</li>
	<li>Was monsters 2x zoals beschreven in stap 1.6.</li>
	<li>Cellen opnieuw opschorten in 200 μL van 2% FBS in PBS.</li>
</ol>2. Flow Cytometrische Analyse
<ol><li>Steek buizen in de flow cytometer en verwerven cellen, in principe volgens het aanbevolen protocol9.</li>
	<li>Noteer 10.000 gebeurtenissen als de lymfocytenpoort (figuur 1A) en exportstroomgegevens als .fcs-bestanden voor analyse.</li>
	<li>Open bestanden in de analysesoftware. Visualiseer de cellen op een voorwaartse verstrooiing (FSC) (A) versus zijverstrooiing (SSC) (A) plot en poortlymfocyten(figuur 1A).</li>
	<li>Nadat u afzonderlijke cellen hebt geselecteerd met FSC (H) vs. FSC (W) en SSC (H) vs. SSC (W)(figuur 1B) en deze hebt weergegeven op een CD3 vs. CD8 of CD3 vs. CD4-plot, wordt de CD8 T-cellen en CD4 T-cellen(figuur 1C)gepoort.</li>
	<li>Nadat u de gated cells hebt geselecteerd en ze hebt weergegeven op een PD-1 vs. menselijke IgG4-plot, identificeert u PD-1-blokkerende antilichaamgebonden CD8- en CD4 T-cellen op basis van isotypebesturing(figuur 1D).</li>
</ol>

<ol><li>Gong, J., Chehrazi-Raffle, A., Reddi, S., Salgia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+PD-1+and+PD-L1+inhibitors+as+a+form+of+cancer+immunotherapy%3A+a+comprehensive+review+of+registration+trials+and+future+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+for+ImmunoTherapy+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Development of PD-1 and PD-L1 inhibitors as a form of cancer immunotherapy: a comprehensive review of registration trials and future considerations.</a> Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 6 (1), 8(2018).</li>
<li>Borghaei, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nivolumab+versus+Docetaxel+in+Advanced+Nonsquamous+Non-Small-Cell+Lung+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nivolumab versus Docetaxel in Advanced Nonsquamous Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 373 (17), 1627-1639 (2015).</li>
<li>Brahmer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nivolumab+versus+Docetaxel+in+Advanced+Squamous-Cell+Non-Small-Cell+Lung+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nivolumab versus Docetaxel in Advanced Squamous-Cell Non-Small-Cell Lung Cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 373 (2), 123-135 (2015).</li>
<li>Herbst, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pembrolizumab+versus+docetaxel+for+previously+treated%2C+PD-L1-positive%2C+advanced+non-small-cell+lung+cancer+%28KEYNOTE-010%29%3A+a+randomised+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial.</a> The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).</li>
<li>Postow, M. A., Sidlow, R., Hellmann, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune-Related+Adverse+Events+Associated+with+Immune+Checkpoint+Blockade%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Immune-Related Adverse Events Associated with Immune Checkpoint Blockade.</a> The New England Journal of Medicine. 378 (2), 158-168 (2018).</li>
<li>Weber, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+Profile+of+Nivolumab+Monotherapy%3A+A+Pooled+Analysis+of+Patients+With+Advanced+Melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Safety Profile of Nivolumab Monotherapy: A Pooled Analysis of Patients With Advanced Melanoma.</a> Journal of Clinical Oncology. 35 (7), 785-792 (2017).</li>
<li>Champiat, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+immune+checkpoint+blockade+dysimmune+toxicities%3A+a+collaborative+position+paper%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Management of immune checkpoint blockade dysimmune toxicities: a collaborative position paper.</a> Annals of Oncology. 27 (4), 559-574 (2016).</li>
<li>Brahmer, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+I+study+of+single-agent+anti-programmed+death-1+%28MDX-1106%29+in+refractory+solid+tumors%3A+safety%2C+clinical+activity%2C+pharmacodynamics%2C+and+immunologic+correlates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Phase I study of single-agent anti-programmed death-1 (MDX-1106) in refractory solid tumors: safety, clinical activity, pharmacodynamics, and immunologic correlates.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (19), 3167-3175 (2010).</li>
<li>Bommareddy, P. K., Lowe, D. B., Kaufman, H. L., Rabkin, S. D., Saha, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-parametric+flow+cytometry+staining+procedure+for+analyzing+tumor-infiltrating+immune+cells+following+oncolytic+herpes+simplex+virus+immunotherapy+in+intracranial+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Methods%22%5BJournal%5D)">Multi-parametric flow cytometry staining procedure for analyzing tumor-infiltrating immune cells following oncolytic herpes simplex virus immunotherapy in intracranial glioblastoma.</a> Journal of Biological Methods. 6 (2), 112(2019).</li>
<li>Osa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+implications+of+monitoring+nivolumab+immunokinetics+in+non-small+cell+lung+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Clinical implications of monitoring nivolumab immunokinetics in non-small cell lung cancer patients.</a> JCI Insight. 3 (19), 59125(2018).</li>
<li>Zelba, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+quantification+of+T-cells+expressing+PD-1+in+patients+on+anti-PD-1+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology%2C+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Accurate quantification of T-cells expressing PD-1 in patients on anti-PD-1 immunotherapy.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 67 (12), 1845-1851 (2018).</li>
<li>Simoni, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bystander+CD8%28%2B%29+T+cells+are+abundant+and+phenotypically+distinct+in+human+tumour+infiltrates%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Bystander CD8(+) T cells are abundant and phenotypically distinct in human tumour infiltrates.</a> Nature. 557 (7706), 575-579 (2018).</li>
<li>Chiu, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+general+method+for+quantifying+IgG-based+therapeutic+monoclonal+antibodies+in+human+plasma+using+protein+G+purification+coupled+with+a+two+internal+standard+calibration+strategy+using+LC-MS%2FMS%5BTitle%5D)+AND+%22Analytica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Development of a general method for quantifying IgG-based therapeutic monoclonal antibodies in human plasma using protein G purification coupled with a two internal standard calibration strategy using LC-MS/MS.</a> Analytica Chimica Acta. 1019, 93-102 (2018).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

In dit artikel rapporteren we een methode met behulp van een flow cytometer om PD-1-blokkerende antilichamen te detecteren die gebonden zijn aan T-cellen afkomstig van een druppel perifeer bloed, die we oorspronkelijk ontwikkelden voor nivolumabdetectie10. Hoewel deze techniek is zeer eenvoudig en gemakkelijk uit te voeren, twee belangrijke punten moeten worden opgemerkt om nauwkeurige resultaten te verkrijgen. Een daarvan is dat om PD-1 moleculen te detecteren, een geschikt antilichaam dat concur...

PD-1-blokkerende antilichamen zijn de standaardkeuze geworden voor de behandeling van verschillende vormen van kanker, waaronder niet-kleincellige longkanker (NSCLC)1,2,3,4. Ze vertonen een opmerkelijk therapeutisch effect bij een subgroep van kankerpatiënten die niet hebben gereageerd op conventionele cytotoxische chemotherapieën. Immuuncontroleremmers (II's), waaronder PD-1-blokkerende antilichamen, kunnen echter een uniek en duidelijk spectrum van bijwerkingen veroorzaken, zogenaamde immuungerelateerde bijwerkingen (irA's)5. Hoewel irAE's bijna alle weefsels kunnen beïnvloeden, worden ze meestal waargenomen in het maag-darmkanaal, endocriene klieren, huid en lever, en ze kunnen preutse, huiduitslag, misselijkheid, diarree en schildklieraandoeningenveroorzaken 6,7. In het algemeen verschijnen de meeste ira's binnen 1 tot 2 maanden na de opening van is-i's. In sommige gevallen kunnen ze echter later dan 1 jaar na het begin van de behandeling of zelfs na stopzetting van de behandeling6,7. Ze veroorzaken ook verschillende symptomen die moeilijk te discrimineren kunnen zijn van andere pathologieën. Het kan dus een uitdaging zijn om irAE's snel te diagnosticeren en op de juiste manier te behandelen. irAE's kunnen invloed hebben op alle weefsels, en hun begin wordt sterk beïnvloed door circulerende immuuncellen, met name T-cellen gebonden aan PD-1-blokkerende antilichamen. Daarom is een eenvoudige en minimaal invasieve methode om antilichaamgerichte T-cellen te controleren belangrijk in klinische omgevingen.
Hier ontwikkelden we een eenvoudige methode om de binding van PD-1-blokkerende antilichamen tegen T-cellen te beoordelen met behulp van een druppel perifeer volbloed van kankerpatiënten die nivolumab of pembrolizumab kregen. Met behulp van deze aanpak konden we elk van de volgende monitoren: 1) de duur van antilichaambinding aan T-cellen, 2) de bezetting van T-cel PD-1 moleculen door therapeutische antilichamen, en 3) de activeringsstatus en immunologische kenmerken van T-cellen. Deze methode is een wijziging van een eerder gerapporteerde techniek8. De benodigde hoeveelheid bloed is bijna gelijk aan die nodig is voor een glucosetest, en de aanpak vereist geen mononucleaire celverrijking of co-culturing met PD-1-blokkerende antilichamen. We hebben bevestigd dat deze methode ook kan worden uitgevoerd met behulp van bevroren monsters, waaronder perifere bloedmononucleaire cellen (PBMC's) en cellen uit pleurale effusie, pericardiale effusie, bronchoalveolar lavage vloeistof, en hersenvocht, wat suggereert dat deze strategie nuttig kan zijn in de context van een multicenter studie. Deze methode kan de vroege diagnose van irAE's vergemakkelijken en ook helpen bij het bepalen van de juiste immunosuppressieve behandelingen om hun symptomen onder controle te houden en de optimale tijden te identificeren om latere therapieën na PD-1-remmers te starten.

<table><tbody><tr><td>10X RBC Lysis Buffer (Multi-species)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>00-4300-54</td><td>50 mL</td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 anti-human CD4 Antibody</td><td>BioLegend</td><td>300518</td><td>Clone RPA-T4</td></tr><tr><td>BD FACS Canto II Flow Cytometer</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 510 anti-human CD8a Antibody</td><td>BioLegend</td><td>301048</td><td>Clone RPA-T8</td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline</td><td>nacalai tesque</td><td>14249-95</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Falcon Round-Bottom Polystyrene Tubes</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>352058</td><td>5 mL</td></tr><tr><td>FcR Blocking Reagent, human</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-059-901</td><td>2 mL</td></tr><tr><td>FLOWJO</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gibco Fetal Bovine Serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12676029</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Mouse IgG1 monoclonal - Isotype control</td><td>abcam</td><td>ab81200</td><td></td></tr><tr><td>Mouse monoclonal Anti-Human IgG4 Fc</td><td>abcam</td><td>ab99825</td><td>Clone HP6025</td></tr><tr><td>Pacific Blue Mouse Anti-Human CD3</td><td>BD</td><td>558117</td><td>Clone UCHT1</td></tr><tr><td>PE-Cy7 Mouse anti-Human CD279 (PD-1)</td><td>BD</td><td>561272</td><td>Clone EH12.1</td></tr><tr><td>PE-Cy7 Mouse IgG1 &kappa; Isotype Control</td><td>BD</td><td>557646</td><td></td></tr></tbody></table>

monitoring pd-1-blocking antilichamen gebonden aan t-cellen afgeleid van een druppel perifeer bloed

Monitoring PD-1-Blocking Antibodies Bound to T Cells Derived from a Drop of Peripheral Blood

Immuun checkpoint remmers, waaronder PD-1-blokkerende antilichamen, hebben aanzienlijk verbeterd behandeling resultaten in verschillende vormen van kanker. De farmacologische werkzaamheid van deze immunotherapieën is langdurig en strekt zich zelfs uit tot na de stopzetting van hun injecties, als gevolg van aanhoudende bloedconcentraties. Hier ontwikkelden we een eenvoudige flow cytometrie test om de T-cel binding status van de PD-1-blokkerende antilichamen nivolumab en pembrolizumab te evalueren. Net als een glucosetest, vereist deze test slechts een druppel perifeer bloed. Het visualiseren van antilichaambinding op T-cellen is betrouwbaarder dan het meten van de concentraties van antilichamen. Bovendien, indien nodig, kunnen we potentieel analyseren veel onderscheidende immuun-gerelateerde markers op T-cellen gebonden aan PD-1-blokkerende antilichamen. Dit is dus een eenvoudige en minimaal invasieve strategie om het farmacologische effect van PD-1-blokkerende antilichamen bij kankerpatiënten te analyseren.

De gating strategie en flow cytometrie analyse (Figuur 1) kan detecteren PD-1-blokkerenantilichaam binding aan T-cellen verkregen uit een daling van NSCLC patiënt perifere bloed. Voordat PD-1-blokkerende antilichaam wordt toegediend, zijn er geen menselijke IgG4-positieve CD8- of CD4 T-cellen aanwezig en kan PD-1-expressie worden bevestigd door een PD-1-detectieantilichaam (EH12.1) (figuur 2A). Na nivolumab of pembrolizumab toediening kan IgG4 (...

We ontwikkelden een eenvoudige flow cytometrie test voor de evaluatie van de binding van PD-1-blokkerende antilichamen tegen T-cellen, waarbij slechts een druppel perifeer bloed van kankerpatiënten.

Monitoring PD-1-Blocking Antilichamen gebonden aan T-cellen afgeleid van een druppel perifeer bloed

Immune checkpoint inhibitors, including PD-1&#8211;blocking antibodies, have significantly improved treatment outcomes in various types of cancer. The ...

Omdat deze methode PD-1-blokkerende antilichaamgebonden cellen bepaalt met behulp van perifeer bloed van patiënten, kan de specifieke subset worden geïdentificeerd die verantwoordelijk is voor antitumor-effecten en immuungerelateerde bijwerkingen. Deze methode heeft slechts een kleine hoeveelheid bloedmonster nodig en het analyseproces is vrij eenvoudig en snel. Het heeft alleen een flow cytometrie machine nodig.Om te beginnen, verzamelen van bloedmonsters in bloedafname buizen met EDTA. Behandel elke vijf milliliter ronde bodem polystyreen stroom cytometrie buis met een milliliter van 2%foetale runder serum in PBS. Vortex voor 10 seconden.Breng vervolgens 20 microliter volbloedmonsters over naar de behandelde vijf milliliter ronde bodembuizen. Voeg 20 microliter van 2%FBS toe aan PBS en 10 microliter van mens-specifieke FC receptor blokkeren reagens. Meng goed en incubeer gedurende 15 minuten op kamertemperatuur.Voeg vervolgens 500 microliters van rode bloedcel lyse buffer. Meng goed en incubeer gedurende 10 minuten op kamertemperatuur. Voeg vier milliliter van 2%FBS toe in PBS en spin down cellen op 400 keer g gedurende vijf minuten bij vier graden Celsius.Verwijder de supernatan

monitoring-pd-1-blocking-antibodies-bound-to-t-cells-derived-from

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dit artikel beschrijft een eenvoudige techniek om allogeen-specifieke anergie induceren in humane perifere bloed mononucleaire cellen. De techniek kan klinisch worden toegepast op niet-alloreactieve donorcellen te genereren. Infusie van deze cellen zou kunnen verbeteren immuun reconstitutie en vermindering van toxiciteit na allogene hematopoietische stamceltransplantatie.

Inductie van allogeen-specifieke anergie in humane perifere bloed mononucleaire cellen door allogeen stimulatie met Co-stimulerende signaal blokkade

Tregs zijn krachtige onderdrukkers van het immuunsysteem. Er is een gebrek van unieke oppervlakte markers om ze te definiëren, dus, de definities van Tregs zijn vooral functioneel. Hier beschrijven we een...

Menselijk In Vitro Onderdrukking als Screening Tool voor de erkenning van een vroege staat van Immune Imbalance

This video demonstrates a flow cytometry-based technique using two fluorochromes to identify CD4+ and CD8+ T cells, γδ T cells, B cells, natural killer (NK) cells, and monocytes in human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). Upon incubating the cells with fluorochrome-conjugated antibodies against the surface markers, the cell subsets are identified using an optimal flow cytometric gating strategy.

A Flow Cytometry Assay to Identify Immune Cell Subsets in Peripheral Blood Mononuclear Cells

Hier beschrijven we een protocol voor het isoleren subsets van precursor B-cellen uit navelstrengbloed. Een voldoende hoeveelheid en kwaliteit van nucleïnezuren kunnen worden geëxtraheerd uit de cellen en gebruikt in daaropvolgende testen gebruik DNA of RNA.

Isolatie van Precursor B-cel subsets van navelstrengbloed

We ontwikkelden een in vitro assay om de rol van immuunregulerende trajecten in de regulatie van cytokine secretie door HIV-specifieke CD4 T-cellen te onderzoeken.

In vitro onderzoek naar de impact van immunoregulatoire Pathways op HIV-specifieke CD4 T-cellen Effectorfunctiemanipulatie Evalueer

Hier voorgesteld is een eenvoudige methode voor het isoleren en flowcytometrische analyse van glioma infiltrerende perifere mononucleaire cellen die tijdsafhankelijk kwantitatieve gegevens over het aantal en activeringsstatus van immuuncellen die het begin hersentumor micro oplevert.

Isolatie en Flow cytometrische analyse van Glioom infiltreren perifere mononucleaire bloedcellen

Het protocol beschrijft een techniek om te bestuderen van de mogelijkheid van primaire polyklonale menselijke T cellen vormen van synaptic interfaces met behulp van vlakke lipide bilayers. We gebruiken deze techniek te laten zien van de differentiële synapse formatie vermogen van menselijke primaire T-cellen afgeleid van lymfeklieren en perifeer bloed.

Beoordeling van de synaptische Interface van primaire menselijke T-cellen uit perifeer bloed en lymfoïde weefsel

De karakterisering van circulerende tumorcellen (Ctc's) is een populair onderwerp in translationeel onderzoek. Dit protocol beschrijft een semiautomatische immunofluorescentie (IF)-test voor PD-L1-karakterisering en inventarisatie van Ctc's in niet-kleincellige longkanker (NSCLC)-patiënt monsters.

Semi-automatische PD-L1 karakterisering en opsomming van circulerende tumor cellen van niet-kleincellige longkanker patiënten door immunofluorescentie

Dit protocol beschrijft klinisch implementeerbare bereiding van hoogwaardige PBMC- en plasmabioamples op de klinische proeflocatie die kunnen worden gebruikt voor translationele biomarkeranalyse.

Voorbereiding van perifere bloedmononucleaire celkorrels en plasma uit een enkele bloedafname op klinische proeflocaties voor biomarkeranalyse

Checkpointremmers zijn belangrijke doelwitten bij het ontwikkelen van therapieën voor de strijd tegen kanker. Dit rapport introduceert een nieuw PDL1-peptide-gebaseerd kankervaccin, PDL1-Vaxx, dat neutraliserende polyklonale antilichaamproductie induceert die de vorming van PD-1/PDL1-complex blokkeert. Dit werk beschrijft ook de ontwikkeling en het testen van een op fluorescerende kralen gebaseerde test voor het analyseren van deze activiteit.

Magnetische fluorescerende kralen-gebaseerde dual-reporter flow-analyse van PDL1-Vaxx peptidevaccin-geïnduceerde antilichaamblokkade van de PD-1/PD-L1-interactie

Dit protocol beschrijft een blokkadetest voor PD-1/PD-L1-remmers met behulp van oppervlakteplasmonresonantietechnologie. Het maakt gebruik van een immobilisatiestrategie in twee stappen en een op maat gemaakt buffersysteem om responseenheden nauwkeurig te meten, waardoor de beoordeling van blokkadesnelheden voor verbindingen of biologische geneesmiddelen wordt vergemakkelijkt. Bovendien ondersteunt het de high-throughput identificatie van PD-1/PD-L1-remmers.

Identificatie van PD-1/PD-L1-remmers met Surface Plasmon Resonance-technologie

Leer een flowcytometrie-assay voor het evalueren van PD-1-blokkerende antilichamen gebonden aan T-cellen met slechts een druppel perifeer bloed. Deze methode identificeert immuuncelsubsets voor kankerimmunotherapie.

Monitoring PD-1-Blocking Antilichamen gebonden aan T-cellen afgeleid van een druppel perifeer bloed

Meer video's verkennen