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JoVE Journal Immunologia e infezioni
Markerless Gene Deletion by Floxed Cassette Allelic Exchange Mutagenesis in Chlamydia trachomatis
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Markerless Gene Deletion di Mamicino Scambio Allelicas in Chlamydia trachomatis

DOI:
10.3791/60848-v

•

10:35 min

•

January 30, 2020

•

,
1Department of Microbiology, Immunology, and Molecular Genetics,University of Kentucky

Capitoli

  • 00:04Introduction
  • 00:27Design and Assembly of pSUmC-4.0 with Homology Arms Specific to the Gene of Interest
  • 02:20Transformation of C. trachomatis with pSUmC 4.0 + Homology Arms for Gene Deletion by Allelic Exchange
  • 05:54Clonal Isolation of Green-only C. trachomatis Deletion Mutant Containing the loxP Flanked Selection Cassette by Limiting Dilution
  • 07:38Transformation of C. trachomatis FRAEM Mutant with pSU-Cre to Initiate Removal of loxP Flanked Selection Cassette
  • 08:42Results: FLAEM Enables Markerless Gene Deletion in C. trachomatis and alleviates Cassette-induced Polar Effects
  • 09:47Conclusion

Summary

Traduzione automatica

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Descritto qui è un metodo per la delezione genica mirata e senza marcatori nella chlamydia trachomatis utilizzando la mutagenesi di scambio letale delle cassette scambiate, FLAEM.

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Keywords: Markerless Gene DeletionFloxed CassetteAllelic Exchange MutagenesisChlamydia TrachomatisHomologous RecombinationPCRDNA AssemblyE. Coli TransformationMcCoy CellsChlamydia Infection

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