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Génération de bibliothèques d’insertion transposon dans les bactéries gramnégatives pour le séquençage à haut débit
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Generating Transposon Insertion Libraries in Gram-Negative Bacteria for High-Throughput Sequencing
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Génération de bibliothèques d’insertion transposon dans les bactéries gramnégatives pour le séquençage à haut débit

DOI:
10.3791/61612-v

•

08:19 min

•

July 07, 2020

•

, ,
1Department of Biology,University of Texas at Arlington

Capitoli

  • 00:04Introduction
  • 00:57Bacterial Mating
  • 02:47Generation of Final Bacterial Mutant Library
  • 04:11DNA Shearing and Poly-C Tail Addition
  • 06:23Results: Transposon Mutant Library
  • 07:31Conclusion

Summary

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Nous décrivons une méthode pour générer des bibliothèques mutantes transposons saturantes chez les bactéries gramnégatives et la préparation subséquente des bibliothèques d’amiplicons d’ADN pour le séquençage à haut débit. À titre d’exemple, nous nous concentrons sur l’agent pathogène ESKAPE, Acinetobacter baumannii, mais ce protocole est accessible à un large éventail d’organismes gramnégatifs.

Tags

Transposon Insertion LibraryGram-negative BacteriaHigh-throughput SequencingEssential GenesAntibiotic ResistanceIn Vivo FitnessMechanical ShearingPoly-CTLRestriction EnzymesAdapter LigationBacterial GeneticsGenotype-phenotype RelationshipsMatingDiaminopimelic AcidGlycerolFrozen Stock

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