/
/
En In Vitro Single-Molecule Imaging Assay til analyse af cap-afhængige oversættelse kinetik
È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Capitoli
- 00:05Introduction
- 00:51Equipment Preparation
- 03:113’-End Biotinylated mRNA Immobilization
- 05:20Translation Mix Assembly and Delivery
- 07:24Results: Analyses for Saccharomyces cerevisiae Translation of a Firefly Luciferase-encoding mRNA
- 09:12Conclusion
Sporing af individuelle oversættelseshændelser giver mulighed for kinetiske undersøgelser i høj opløsning af cap-afhængige oversættelsesmekanismer. Her demonstrerer vi en in vitro enkeltmolekyleanalyse baseret på billeddiagnostiske interaktioner mellem fluorescerende mærkede antistoffer og epitop-mærkede spirende peptider. Denne metode muliggør enkeltmolekylekarakterisering af initiering og peptidforlængelse kinetik under aktiv in vitro cap-afhængig oversættelse.
