/
/
En In Vitro single-molecule imaging assay for analyse av cap-avhengig oversettelse kinetikk
È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Capitoli
- 00:05Introduction
- 00:51Equipment Preparation
- 03:113’-End Biotinylated mRNA Immobilization
- 05:20Translation Mix Assembly and Delivery
- 07:24Results: Analyses for Saccharomyces cerevisiae Translation of a Firefly Luciferase-encoding mRNA
- 09:12Conclusion
Sporing av individuelle oversettelseshendelser gir mulighet for kinetiske studier med høy oppløsning av capavhengige oversettelsesmekanismer. Her demonstrerer vi en in vitro enkeltmolekylanalyse basert på bildeinteraksjoner mellom fluorescerende merkede antistoffer og epitopmerkede nascent peptider. Denne metoden muliggjør enkeltmolekyl karakterisering av initiering og peptid forlengelse kinetikk under aktiv in vitro cap-avhengig oversettelse.
