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CRISPR/Cas9 द्वारा जीन नॉक-इन और मैक्रोफेज और टी सेल लाइनों में सेल छंटाई
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Capitoli
- 00:05Introduction
- 00:32Design and Plasmid Construction of sgRNAs Targeting Rosa26 Locus
- 02:28Design and Construction of Targeting Vector as Homologous Recombination Template
- 03:46Electroporation of Macrophage and T Cell Lines
- 07:19Cell Sorting to Isolate Putative Knock-in Cells
- 08:58Screening and Validation of Positive Knock-in Cells
- 10:16Representative Results
- 10:52Conclusion
यह प्रोटोकॉल मैक्रोफेज और टी सेल लाइनों में दस्तक प्रयोगों को सरल बनाने के लिए फ्लोरोसेंट रिपोर्टर्स और सेल छंटाई का उपयोग करता है। इन सरलीकृत दस्तक प्रयोगों के लिए दो प्लाज्मिड का उपयोग किया जाता है, नामत CRISPR/Cas9-और DsRed2-एक्सप्रेस प्लाज्मिड और एक मुताबिक़ रीकॉम्बिनेशन डोनर प्लाज्मिड व्यक्त करते हुए EBFP2, जो प्रतिरक्षा कोशिकाओं में Rosa26 लोकस में स्थायी रूप से एकीकृत है ।
