È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Capitoli
- 00:05Introduction
- 00:44Generation of Baculovirus-infected TIPS Cells
- 03:05Production of AAV Vector
- 05:08Lysis of Cells and Release of AAV
- 06:07Purification of AAV Vector Using Affinity Column Chromatography System
- 08:03Concentration and Diafiltration of AAV Vector Using Tangential Flow Filtration (TFF)
- 08:54Results: Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector Using Baculovirus-Insect Cell Culture System
- 09:48Conclusion
في هذا البروتوكول ، يتم إنتاج ناقل AAV2 عن طريق زراعة خلايا الحشرات Spodoptera frugiperda (Sf9) مع فيروس الكولو (BV) - AAV2 - بروتين الفلورسنت الأخضر (GFP) أو الجين العلاجي وBV-AAV2-rep-cap المصابة خلايا Sf9 في ثقافة التعليق. يتم تحرير جزيئات AAV من الخلايا باستخدام المنظفات ، وتوضيحها ، وتنقيتها عن طريق الكروماتوغرافيا عمود تقارب ، وتتركز عن طريق ترشيح تدفق عرضي.
