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バキュロウイルス昆虫細胞培養システムを用いたアデノ関連ウイルス(AAV)2ベクターの製造と精製のためのプロセス開発
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Biologia
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JoVE Journal Biologia
Process Development for the Production and Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector using Baculovirus-Insect Cell Culture System
DOI:

10:31 min

January 13, 2022

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Capitoli

  • 00:05Introduction
  • 00:44Generation of Baculovirus-infected TIPS Cells
  • 03:05Production of AAV Vector
  • 05:08Lysis of Cells and Release of AAV
  • 06:07Purification of AAV Vector Using Affinity Column Chromatography System
  • 08:03Concentration and Diafiltration of AAV Vector Using Tangential Flow Filtration (TFF)
  • 08:54Results: Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector Using Baculovirus-Insect Cell Culture System
  • 09:48Conclusion

Summary

Traduzione automatica

このプロトコルでは、AAV2ベクターは、バキュロ ウイルス (BV)-AAV2-緑色蛍光タンパク質(GFP)または治療遺伝子およびBV-AAV2-Rep-cap感染したSf9細胞を懸濁培養中にSf9細胞と共培養することによって産生される。AAV粒子は、洗浄剤を使用して細胞から放出され、精製され、親和性カラムクロマトグラフィーによって精製され、接線流ろ過によって濃縮される。

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