È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Capitoli
- 00:05Introduction
- 00:44Generation of Baculovirus-infected TIPS Cells
- 03:05Production of AAV Vector
- 05:08Lysis of Cells and Release of AAV
- 06:07Purification of AAV Vector Using Affinity Column Chromatography System
- 08:03Concentration and Diafiltration of AAV Vector Using Tangential Flow Filtration (TFF)
- 08:54Results: Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector Using Baculovirus-Insect Cell Culture System
- 09:48Conclusion
I denne protokollen er AAV2 vektor produsert av co-culturing Spodoptera frugiperda (Sf9) insektceller med baculovirus (BV)-AAV2-grønn fluorescerende protein (GFP) eller terapeutisk gen og BV-AAV2-rep-cap infiserte Sf9 celler i suspensjon kultur. AAV-partikler frigjøres fra cellene ved hjelp av vaskemiddel, avklares, renses av affinitetskolonnekromatografi og konsentreres av tangentiell strømningsfiltrering.
