ניקוי אופטי של רקמות צמחים להדמיית פלואורסצנטיות

שיטה זו יכולה להיות מועילה בהדמיה של צמח שלם כדי לחשוף מורפולוגיה שלמה, תהליכים התפתחותיים ואינטראקציות של חיידקים צמחיים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שאנחנו יכולים להתבונן ישירות בחלק הפנימי של גוף הצמח מבלי לגרום נזק על זה. כמו שיטה זו חלה על מגוון רחב של מינים ורקמות צמחים, זה יכול לעזור להאיץ את הגילוי של תופעות חדשות במחקר הביולוגי של הצמח.

קיבעון הוא צעד קריטי בהליך זה. לפני שלב הסליקה, צריך לבדוק את עוצמת החלבון הפלואורסצנטי לאחר הקיבעון. כדי להתחיל לטבול דגימות צמחים בתמיסה המקבעת בצינור מיקרו, ולוודא כי נפח הפתרון הקיבוצי הוא יותר מפי חמישה מנפח המדגם.

לאטום את צינור מיקרו עם parafilm ולעשות חורים באמצעות מחט. מניחים את צינור המיקרו במייבש ולהתאים לאט את מידת הוואקום לסביבות 690 מילימטרים של כספית, כך בועות מופיעות בהדרגה מן הדגימות. כבה את משאבת הוואקום לאחר פינוי המייבש.

לפרוק את ההתייבשות בזהירות מבלי להפריע לדגימות. הפעל שוב את משאבת הוואקום וכבה אותה לאחר פינוי המייבש. פתח את התייבשות בזהירות מבלי להקפיץ את הפתרון הקיבוצי במיקרו-tube.

הסר את הפתרון הקיבוצי והוסף PBS 1x עם פיפטה מיקרו. לאחר אחסון למשך דקה אחת, החלף את ה- PBS הישן ב- PBS 1x חדש. לאחר הסרת PBS פי חמישה מנפח המדגם של פתרון הסליקה, לאטום את צינור המיקרו עם parafilm ולעשות חורים עם מחט.

מקם את הדגימות במייבש. לפנות ולכבות את משאבת ואקום. פתח את המייבש בעדינות, ולאחר מכן סגור את microtube.

הפוך את צינור המיקרו, כל יום עד יומיים כדי להאיץ את תהליך הסליקה. עבור מסגרת מרווח, לחתוך יריעת גומי סיליקון עם סכין גילוח התאמת עובי גיליון גומי סיליקון בהתאם לעובי המדגם. מניחים את מסגרת הסיליקון על כיסוי, ואז מניחים את הדגימות שטופלו בתוך המסגרת ומוסיפים כ -100 מיקרוליטרים של פתרון ניקוי כדי להסיר בועות.

לכסות עם זכוכית כיסוי נוספת כדי למנוע אידוי של פתרון הסליקה. שימו לב לדגימות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. לאחר התצפית להחזיר את הדגימות לפתרון ניקוי במיקרו-צינור.

עלים קבועים של מינים שונים היו דגירה PBS או ClearSee במשך שמונה ימים, ב ClearSee או ClearSeeAlpha במשך יומיים. ClearSee יכול לנקות עלים של מינים שונים. לאחר חילוץ הציפורן, ClearSee יכול לנקות עלי אורז.

כמו רכיב נתרן סולפיט ב ClearSeeAlpha מונע חמצון פוליפנול בשל ההשפעה המפחיתה, ClearSeeAlpha יכול לנקות טבק ו tirania pistils ללא כל פיגמנטציה חומה. Ubiquitin-10 מקדם H2B-mClover עלים של arabidopsis טאליאנה טופלו עם PBS או ClearSee במשך שלושה ימים. טיפול ClearSee הפחית את הצבע הירוק החיוור של עלה Arabidopsis H2B-mClover ולשפר את עוצמת הפלואורסצנטיות של H2B-mClover בהשוואה לדגירה PBS.

עלים שטופלו ב- ClearSee נצפו על ידי מיקרוסקופיה של עירור שני פוטונים עם עירור של 950 ננומטר. דופן התא מוכתמת בקלקלפלור-לבן. גרעינים מסומנים עם ubiquitin-10 מקדם, H2B-mClover.

התמונות Y Z ו- X Z הן חתכים במיקום המצוין על-ידי הקווים המסווגים הלבנים. הכנת הפתרון הקבוע חשובה כדי לתקן את הדגימות. עם זאת, יש לנקוט בזהירות כדי למנוע נזק לדגימות תחת ואקום.

הדמיה מיקרוסקופית יכולה להתבצע כדי לחקור דפוסי ביטוי גנים מרובים ותקשורת תאית במהלך התפתחות הצמח וזיהום בעקבות הליך זה.