Name: Bioprospezione dei microrganismi estremofili per affrontare linquinamento ambientale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-30T16:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 20 s
Description: Impara a isolare microrganismi resistenti ai metalli pesanti da sorgenti geotermiche per applicazioni di biosensing e bioremediamento. Questo protocollo semplificato facilita la caratterizzazione di nuove specie utili al monitoraggio ambientale.

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Questo lavoro è stato supportato da ERA-NET Cofund MarTERA: "FLAshMoB: Functional Amyloid Chimera for Marine Biosensing", PRIN 2017-PANACEA CUP:E69E19000530001 e da GoodbyWaste: ObtainGOOD products-exploit BY-products-reduce WASTE, MIUR 2017-JTNK78.006, Italia. Si ringraziano la Dott.ssa Monica Piochi e la Dott.ssa Angela Mormone (Istituto Nazionale di Geofisica e Vulcanologia, Sezione di Napoli Osservatorio Vesuviano, Italia) per l'identificazione e la caratterizzazione del sito geotermico.

1. Campionamento di microrganismi da siti geotermici
<ol><li>Scegliere il sito per il campionamento utilizzando come criterio i luoghi con la temperatura e il pH desiderati. Misurare i parametri fisici attraverso una sonda termocoppia digitale, inserendola nelle piscine o nei fanghi selezionati.</li>
	<li>Raccogliere 20 g di campioni di terreno (in questo caso, dal fango nel sito idrotermale di Pisciarelli Solfatara), raccogliendoli con un cucchiaio sterilizzato. Prelevare almeno due campioni per ogni sito scelto.</li>
	<li>Mettere i campioni in tubi di polipropilene sterile da 50 ml e chiudere immediatamente.</li>
	<li>Misura pH e temperatura con una sonda termocoppia digitale inserendola direttamente nel sito di campionamento. Dopo l'uso, sciacquare accuratamente la sonda con acqua deionizzata.</li>
</ol>2. Isolamento di microrganismi resistenti ai metalli pesanti
NOTA: Eseguire i passaggi 2.1-2.7 sotto un cappuccio biologico sterile.
<ol><li>Inoculare 2 g di ciascun campione raccolto in 50 ml di terreno Luria-Bertani (LB) appena preparato, in cui il pH è stato regolato a 4 o 7 attraverso l'aggiunta di HCl o NaOH.</li>
	<li>Incubare i campioni alla stessa temperatura del sito di campionamento e a ±5 °C (55 °C e 60 °C per i campioni Pisciarelli) in uno shaker orbitale a temperatura controllata per 24 ore con una velocità di agitazione di 180 giri/min.</li>
	<li>Piastra 200 μL dei campioni coltivati su LB agar (pH 4 o pH 7) e incubare in stato statico per 48 ore a 55 °C o 60 °C.</li>
	<li>Isolare le singole colonie e ripetere i cicli di streak-plating (passaggi 2.3 e 2.4) almeno tre volte.</li>
	<li>Per preparare scorte cellulari congelate a -80 °C, far crescere le colture durante la notte (ON) e aggiungere alle cellule cresciute il 20% di glicerolo (in un volume finale di 1 mL); utilizzare una miscela di acetone e ghiaccio secco per un congelamento rapido.</li>
	<li>Per preparare un inoculo da un ceppo di glicerolo, inoculare 50 μL in 50 mL di LB (pH 4 o pH 6) e incubare a 55 °C o 60 °C nello shaker orbitale a 180 rpm ON.</li>
	<li>Per ottenere un profilo di crescita, diluire una precoltura (ottenuta dallo stadio 2.6) a 0,1 OD600 nm in 10 mL di LB (pH 4 o pH 6), far crescere le cellule a 55 °C o 60 °C per 16 ore nello shaker orbitale e misurare l'OD600 nm a intervalli di 30 minuti.</li>
	<li>Costruisci una curva di crescita dai dati ottenuti nel passaggio 2.7 con tempo (min) sull'asse X e OD600 nm sull'asse Y.</li>
	<li>Realizzare la stessa curva di crescita descritta nei passaggi 2.7 e 2.8 ma variando il pH (± 1 unità) del terreno di coltura (ad esempio, pH 3 e 5 per campioni cresciuti a pH 4) per determinare il pH ottimale per le condizioni di laboratorio.</li>
</ol>3. Identificazione degli isolati microbici
<ol><li>Preparazione del DNA genomico<ol>
<li>Inoculare l'isolato striato dal materiale di glicerolo in 50 mL di terreno LB (pH 4 o pH 6) e crescere in uno shaker orbitale a 55 °C o 60 °C a 180 giri/min ON.</li>
		<li>Raccogliere la coltura ON per centrifugazione per 10 minuti a 5000 x g. Scartare il surnatante.</li>
		<li>Preparare 10 mL di tampone di lisi batterica composto da: 20 mM Tris-HCl pH 8,0, 2 mM EDTA, 1,2% Triton X-100 e lisozima (20 mg/mL) immediatamente prima dell'uso.</li>
		<li>Risospesare il pellet in 180 μL di tampone di lisi batterica. Incubare per 30 minuti a 37 °C.</li>
		<li>Seguire le linee guida indicate da un kit di purificazione del DNA genomico (Tabella dei materiali) per estrarre il DNA genomico.</li>
		<li>Quantificare il DNA genomico estratto e la sua purezza mediante misurazione UV-Vis. Per la purezza determinare i rapporti-OD 260/280 nm e OD 260/230 nm.</li>
		<li>Valutare l'integrità del DNA genomico caricando 200 ng di ciascun campione su un gel di agarosio allo 0,8% e confrontando la distribuzione dimensionale con un marcatore molecolare ad alto peso.</li>
		<li>Commissione ad un servizio esterno della preparazione, del sequenziamento e dell'analisi comparativa dei frammenti di rRNA 16S della sequenza ottenuta (1000 bp) con quelli presenti nel database nucleotidico del National Center for Biotechnology Information (NCBI)33 degli Stati Uniti.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Per corroborare i dati del sequenziamento dell'rRNA 16S, eseguire anche la ribotipizzazione automatizzata sul DNA cromosomico digerito (servizio esterno, Tabella dei materiali).</li>
	<li>Nel caso in cui l'identificazione della specie non possa essere determinata solo con i dati di ribotipizzazione, commissionare un'analisi MALDI-TOF MS per l'identificazione degli acidi grassi.</li>
	<li>Per eseguire un'analisi filogenetica del genere identificato, analizzare la sequenza di rRNA 16S dell'isolato con BLASTn34. Le sequenze con identità dal 99% al 97% devono essere utilizzate per costruire un allineamento di sequenze multiple utilizzando CLUSTAL Omega35. Costruisci un albero adiacente usando l'opzione predefinita di ClustalW2 (Simple Phylogeny).</li>
</ol>4. Suscettibilità ai metalli pesanti e agli antibiotici
<ol><li>Inoculare l'isolato da un ceppo di glicerolo (vedere punto 2.5) e coltivarlo in 200 ml di LB nelle condizioni ottimali di pH e temperatura precedentemente determinate.</li>
	<li>Diluire ogni precoltura a 0,1 OD600 nm in 5 mL di terreno LB (al pH appropriato) contenente concentrazioni crescenti di metalli pesanti. Le concentrazioni variano da 0,01-120 mM per i metalli pesanti [As(V), As(III), Cd(II), Co(III), Cr(VI), Cu(II), Hg(II), Ni(II), V(V)] o 0,5-1 mg/mL per gli antibiotici [Ampicillina, Bacitracina, Cloramfenicolo, Ciprofloxacina, Eritromicina, Kanamicina, Streptomicina, Tetraciclina e Vancomicina].</li>
	<li>Eseguire trattamenti con metalli pesanti e antibiotici separatamente. Utilizzare un tubo di polipropilene da 50 mL e far crescere le celle in uno shaker orbitale a temperatura controllata con una velocità di scuotimento di 180 giri / min a 55 ° C o 60 ° C per 16 ore per ogni condizione / trattamento.</li>
	<li>Calcola la concentrazione minima inibitoria (MIC) sia per antibiotici che per metalli pesanti identificando i valori di concentrazione nei tubi in cui non si verifica la crescita microbica, cioè determinando i valori che inibiscono completamente la crescita cellulare dopo 16 ore.</li>
	<li>Verificare che la concentrazione sia inibitoria e non letale per le cellule placcando 200 μL della coltura coltivata al valore che si considera MIC su piastre LB-agar (al pH e alla temperatura appropriati) e verificando la presenza di colonie dopo incubazione ON. NOTA: Poiché la coltura su piastra di agar LB è praticabile a 4 °C solo per alcune settimane, al fine di conservare gli isolati per un tempo più lungo, le scorte di glicerolo sono state preparate e conservate a -80 °C. Per la determinazione del MIC, sono state effettuate almeno tre repliche indipendenti utilizzando colture indipendenti. La deviazione standard è stata calcolata tra gli esperimenti triplicati.</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse.

Le sorgenti termali contengono una diversità non sfruttata di microbiomi con capacità metaboliche altrettanto diverse12. Lo sviluppo di strategie per l'isolamento di microrganismi in grado di convertire efficacemente i metalli pesanti in composti meno tossici10 rappresenta un'area di ricerca di crescente interesse a livello mondiale. Questo documento mira a descrivere un approccio semplificato per lo screening e l'isolamento dei microbi con la capacità di resistere alle sos...

Gli ambienti estremi del nostro pianeta sono eccellenti fonti di microrganismi in grado di tollerare condizioni difficili (cioè temperatura, pH, salinità, pressione e metalli pesanti)1,2, essendo Islanda, Italia, STATI UNITI, Nuova Zelanda, Giappone, Africa centrale e India, le aree vulcaniche più riconosciute e studiate 3,4,5,6,7,8,9 . I termofili si sono evoluti in ambienti difficili in un intervallo di temperature da 45 °C a 80 °C 10,11,12. I microrganismi termofili, appartenenti al regno archeale o batterico, sono un serbatoio per lo studio della biodiversità, della filogenesi e della produzione di biomolecole esclusive per applicazioni industriali 13,14,15,16. Infatti, negli ultimi decenni, la continua domanda industriale nel mercato globale ha favorito lo sfruttamento di estremofili e termoenzimi per le loro applicazioni diversificate in diversi campi biotecnologici 17,18,19.
Le sorgenti termali, dove gli organismi vivono in consorzi, sono ricche fonti di biodiversità, rappresentando quindi un habitat attraente per studiare l'ecologia microbica20,21. Inoltre, queste aree vulcaniche ricche di metalli sono comunemente colonizzate da microrganismi che hanno evoluto sistemi di tolleranza per sopravvivere e adattarsi alla presenza di metalli pesanti22,23 e sono quindi attivamente coinvolti nei loro cicli biogeochimici. Al giorno d'oggi, i metalli pesanti sono considerati inquinanti prioritari per l'uomo e l'ambiente. I microrganismi resistenti ai metalli pesanti sono in grado di solubilizzare e precipitare i metalli trasformandoli e rimodellando i loro ecosistemi24,25. La comprensione dei meccanismi molecolari della resistenza ai metalli pesanti è un argomento caldo per l'urgenza di sviluppare nuovi approcci verdi 26,27,28. In questo contesto, la scoperta di nuovi batteri tolleranti rappresenta il punto di partenza per lo sviluppo di nuove strategie per il biorisanamento ambientale24,29. Accompagnando gli sforzi per esplorare gli ambienti idrotermali attraverso procedure microbiologiche e aumentare le conoscenze sul ruolo dei geni alla base della tolleranza ai metalli pesanti, è stato condotto uno screening microbico nell'area termale dei Campi Flegrei in Italia. Questo ambiente ricco di metalli pesanti mostra una potente attività idrotermale, fumarole e piscine bollenti, variabili in pH e temperatura in dipendenza della stagionalità, delle precipitazioni e dei movimenti geologici sotterranei30. In questa prospettiva, descriviamo un modo facile da applicare ed efficace per isolare batteri resistenti ai metalli pesanti, ad esempio, Geobacillus stearothermophilus GF1631 (denominato isolato 1) e Alicyclobacillus mali FL1832 (denominato isolato 2) dalla zona di Pisciarelli dei Campi Flegrei.

<table><tbody><tr><td>Ampicillina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9393</td><td></td></tr><tr><td>Aura Mini</td><td>bio air s.c.r.l.</td><td></td><td>Cappa biologica</td></tr><tr><td>Bacitracin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>B0125</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di cadmio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>202908</td><td></td></tr><tr><td>Cloramfenicolo</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C0378</td><td></td></tr><tr><td>Ciprofloxacina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>17850</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di cobalto</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C8661</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di</td> <td>rameSigma Aldrich</td><td>224332</td><td></td></tr><tr><td>Eritromicina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E5389</td><td></td></tr><tr><td>Servizio Esterno</td><td>DSMZ</td><td></td><td>Istituto Leibniz DSMZ-Collezione Tedesca di Microrganismi e Colture Cellulari GmbH</td></tr><tr><td>Kit di Purificazione del DNA Genomico</td><td>Thermo Scientific</td><td>#K0721</td><td></td></tr><tr><td>Solfato di Kanamicina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60615</td><td></td></tr><tr><td>MaxQTM 4000 Agitatore orbitale da banco</td><td>Thermo Scientific</td><td>SHKE4000</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di mercurio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>215465</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 1000 Spettrofotometro</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di nichel</td><td>Sigma Aldrich</td><td>654507</td><td></td></tr><tr><td>Orion Star A221 Misuratore di pH portatile</td><td>Thermo Scientific</td><td>STARA2218</td><td></td></tr><tr><td>Sodio (meta) arsenito</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S7400</td><td></td></tr><tr><td>Arseniato di sodio eptaidrato bibasico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A6756</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di sodio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>Streptomicina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6501</td><td></td></tr><tr><td>Tetraciclina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>87128</td><td></td></tr><tr><td>Triptone BioChemica</td><td>Applichem Panreac</td><td>A1553</td><td></td></tr><tr><td>Vancomicina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>PHR1732</td><td></td></tr><tr><td>Estratto di lievito per biologia molecolare</td><td>Applichem Panreac</td><td>&nbsp; A3732</td><td></td></tr></tbody></table>

bioprospezione dei microrganismi estremofili per affrontare l'inquinamento ambientale

Bioprospecting of Extremophilic Microorganisms to Address Environmental Pollution

Le sorgenti geotermiche sono ricche di vari ioni metallici a causa dell'interazione tra roccia e acqua che avviene nella falda acquifera profonda. Inoltre, a causa della variazione stagionale del pH e della temperatura, la fluttuazione della composizione degli elementi viene periodicamente osservata all'interno di questi ambienti estremi, influenzando le comunità microbiche ambientali. I microrganismi estremofili che prosperano nelle bocche termiche vulcaniche hanno sviluppato meccanismi di resistenza per gestire diversi ioni metallici presenti nell'ambiente, prendendo così parte a complessi cicli biogeochimici metallici. Inoltre, gli estremofili e i loro prodotti hanno trovato un ampio punto d'appoggio nel mercato, e questo vale soprattutto per i loro enzimi. In questo contesto, la loro caratterizzazione è funzionale allo sviluppo di biosistemi e bioprocessi per il monitoraggio ambientale e il biorisanamento. Ad oggi, l'isolamento e la coltivazione in condizioni di laboratorio di microrganismi estremofili rappresentano ancora un collo di bottiglia per sfruttare appieno il loro potenziale biotecnologico. Questo lavoro descrive un protocollo semplificato per l'isolamento di microrganismi termofili da sorgenti termali e la loro identificazione genotipica e fenotipica attraverso le seguenti fasi: (1) Campionamento di microrganismi da siti geotermici ("Pisciarelli", un'area vulcanica dei Campi Flegrei a Napoli, Italia); (2) Isolamento di microrganismi resistenti ai metalli pesanti; (3) Identificazione di isolati microbici; (4) Caratterizzazione fenotipica degli isolati. Le metodologie descritte in questo lavoro potrebbero essere generalmente applicate anche per l'isolamento di microrganismi provenienti da altri ambienti estremi.

Sito di campionamento Questo protocollo illustra un metodo per l'isolamento di batteri resistenti ai metalli pesanti da una sorgente calda. In questo studio, l'area di Pisciarelli, un ambiente geotermico acido-solfidico, è stata utilizzata come sito di campionamento (Figura 1). Questo ecosistema è caratterizzato dal flusso di fluidi solforosi aggressivi derivati da attività vulcaniche. È stato dimostrato che le comunità microbiche nei sistemi geotermici a...

L'isolamento di microbi resistenti ai metalli pesanti dalle sorgenti geotermiche è un argomento caldo per lo sviluppo di biosistemi di biorisanamento e monitoraggio ambientale. Questo studio fornisce un approccio metodologico per isolare e identificare i batteri tolleranti ai metalli pesanti dalle sorgenti termali.

Bioprospezione dei microrganismi estremofili per affrontare l'inquinamento ambientale

Geothermal springs are rich in various metal ions due to the interaction between rock and water that takes place in the deep aquifer. Moreover, due to ...

Il protocollo descrive un approccio semplificato per lo screening e l'isolamento di microbi resistenti ai metalli pesanti da sorgenti geotermiche. Questo approccio rappresenta un'area di ricerca di crescente interesse a livello mondiale per l'applicazione nel campo del biorilevamento e del biorisanamento. Il metodo ivi descritto può essere facilmente modificato per isolare i microbi da diverse fonti ambientali come acqua, cibo, suolo o sedimenti.La concentrazione minima inibitoria per identificare un microbi resistente è una strategia rapida per caratterizzare le nuove specie o ceppi. Questo protocollo è facile da eseguire e richiede solo abilità manuale ed esperienza con le tecniche di microbiologia di base. Per iniziare, inoculare due grammi di campione raccolto in 50 microliti di terreno Luria-Bertani appena preparato con un pH di quattro o sette.Incubare questo campione alla temperatura del sito di campionamento più o meno cinque gradi Celsius. Piastra 200 microlitri del campione su Agar Luria-Bertani con un pH di quattro o sette e mantenerlo in condizioni statiche a 55 o 60 gradi Celsius per 48 ore. Dopo l'incubazione, isolare le singole colonie e ripetere questo ciclo di placcatura delle striature almeno tre volte.Per preparare un millilitro di brodo cellulare congelato, aggiungere il 20% di glicerolo alle cellule coltivate durante la notte. Utilizzare una miscela di acetone e ghiaccio secco per un congelamento rapido. Per preparare un inoculo da un brodo di glicerolo, inoculare 50 microlitri in 50 millilitri di Luria-Bertani.Per ottenere un profilo di crescita, diluire questa precoltura in 10 microlitri di Luria-Bertani. Per regolare la densità ottica a 0,1 aggiungere 600 nanometri. Far crescere queste cellule per 16 ore a 55 o 60 gradi Celsius nello shaker orbitale.Misurare la densità ottica a 600 nanometri a intervalli di 30 minuti. Curva da questi dati con il tempo sull'asse X e la densità ottica a 600 nanometri sull'asse Y. Tracciare curve di crescita simili con pH variabile del terreno di coltura, per determinare il pH ottimale per le condizioni di laboratorio, inoculare l'isolato striato dal brodo di glicerolo in 50 microlitri del mezzo Luria-Bertani e incubare durante la notte.Centrifuga questa coltura coltivata durante la notte per 10 minuti a 5.000 volte G, quindi scarta il surnatante e raccogli la tavolozza di coltura. Preparare 10 millilitri di tampone di lisi batterica composto da 20 tris-HCL millimolari, due EDTA millimolari, 1,2% Triton X-100 e 20 milligrammi per millilitro lisosoma immediatamente prima dell'uso. Sospendere nuovamente il pellet in 180 microlitri di tampone di batterilisi.Estrazione del DNA genomico come indicato nel kit di purificazione e misura del DNA genomico e della sua purezza mediante UV-Vis. Per valutare la purezza, determinare i rapporti di densità ottica da 260 a 280 e da 260 a 230. Valutare l'integrità del DNA genomico caricando 200 nanogrammi di ciascun campione su un gel di agarosio allo 0,8% e confrontando la distribuzione dimensionale con un marcatore molecolare di altezza e peso.Coltiva l'isolato dallo stock di glicerolo in 200 millilitri di condizioni ottimali di pH e temperatura di Luria-Bertani. Diluire ogni precoltura in cinque millilitri di terreno Luria-Bertani in 50 millilitri di tubi di polipropilene contenenti concentrazioni crescenti di metalli pesanti e antibiotici per ottenere una densità ottica di 0,1 a 600 nanometri. Far crescere le cellule per 16 ore su uno shaker orbitale con 180 giri al minuto a 55 o 60 gradi Celsius.Calcolare la concentrazione minima inibitoria per antibiotici o metalli pesanti identificando i valori di concentrazione nei tubi in cui non si verifica la crescita microbica. Verificare che la concentrazione sia inibitoria e non letale per le cellule placcando 200 microlitri della coltura coltivata a concentrazioni minime inibitorie su piastre di agar Luria-Bertani e verificando la presenza di colonie dopo incubazione notturna. Questo protocollo è stato utilizzato per testare campioni batterici provenienti dall'area di Piscarelli, un ambiente geotermico solforico acido La caratterizzazione fenotipica dei microrganismi isolati ha dimostrato che l'isolato ha una maggiore tolleranza all'arseniato e al vanadato ed è resistente al cadmio.Dati comparativi suggeriscono che l'isolato uno ha una forte resistenza all'arsenico pentavalente mentre l'isolato due ha resistenza all'arsenico trivalente. I test di resistenza agli antibiotici hanno dimostrato che isolare uno è altamente sensibile a tutti gli antibiotici testati anche quando sono state utilizzate basse concentrazioni. Al contrario, l'isolato due è resistente a tutti gli antibiotici testati ad eccezione del cloramfenicolo e della tetraciclina.Il microrganismo probabilmente ha acquisito resistenza agli antibiotici a causa di mutazioni casuali o trasferimento genico orizzontale che rappresenta un vantaggio selettivo in condizioni ambientali estreme. Questo studio dimostra l'utilità di tali metodi per selezionare microrganismi ambientali in grado di inattivare gli inquinanti e convertirli in prodotti innocui.

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Eucarioti microbiche sono sia una fonte di carbonio fotosinteticamente derivato e le prime specie di predatori in modo permanente coperti di ghiaccio dei laghi antartici. Questo rapporto descrive un approccio coltura di arricchimento per isolare metabolicamente eucarioti microbici versatili dal lago antartico, Bonney Lake, e valuta il potenziale fissazione del carbonio inorganico mediante un saggio di radioisotopi per la ribulosio-1 ,5-bisphophate carbossilasi ossigenasi (RuBisCo) attività.

Istituzione di microbiche colture di arricchimento eucariotiche da un chimicamente Stratificati Antarctic Lake e valutazione del potenziale fissazione del carbonio

Fonte: Villela, H. D. M. , et al. Prospezione di ceppi microbici per la biorimediazione e lo sviluppo di probiotici per la ricerca e la conservazione dei metaorganismi. J. Vis. Esp. (2019).Questo video dimostra l'isolamento dei batteri marini che degradano gli inquinanti tramite diluizione seriale, selezione delle colonie e crescita in un mezzo contenente EE2. Utilizzando EE2 come unica fonte di carbonio, il protocollo identifica ceppi batterici in grado di metabolizzare questo inquinante...

Screening dei batteri marini per l'isolamento di ceppi degradanti di inquinanti

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Presentiamo il processo di isolamento, propagazione e caratterizzazione dei batteri che degradano gli idrocarburi dagli habitat acquatici. Il protocollo delinea l'isolamento batterico, l'identificazione con il metodo 16S rRNA e il test del loro potenziale di degradazione degli idrocarburi. Questo articolo aiuterebbe i ricercatori a caratterizzare la biodiversità microbica nei campioni ambientali e in particolare a selezionare i microbi con potenziale di biorisanamento.

Isolamento, propagazione e identificazione di specie batteriche con proprietà metabolizzanti di idrocarburi da habitat acquatici

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