Использование инъекции клеточного индикатора для исследования происхождения неоинтимообразующих клеток в модели мешковидной боковой стенки крысы

Используя прямое применение внутриаортального индикатора клеток, мы можем проанализировать роль эндотелиальных клеток, происходящих из родительской артерии, в формировании неоинтимы в двух разных точках времени. Большим преимуществом этой техники является прямая, одноточечная, интерпретирующая инъекция in vivo, которая делает эту модель надежной и воспроизводимой техникой. Перед операцией инкубируют артериальные мешочки от донорских крыс в 0,1% додецилсульфата натрия в течение 10 часов при 37 градусах Цельсия для получения децеллюляризованных аневризм.

Соберите эти мешочки с животных-доноров за несколько дней до операции. Для начала проанализируйте поведение животного и осмотрите слизистые оболочки и тургор в рамках предоперационного клинического обследования. Запишите вес каждого животного.

Для индукции анестезии поместите всех крыс в чистую коробку, обеспеченную кислородом, до потери сознания через пять-10 минут. Проверьте глубину анестезии по отсутствию рефлекса снятия педали. Поместите крыс в лежачее положение и побрейте торакоабдоминальную область электробритвой.

С помощью ленты зафиксируйте лапы крысы на доске, покрытой грелкой, подключенной к авторегулирующему ректальному зонду. Вставьте ректальный зонд в анус крысы для поддержания нужной температуры 37 градусов Цельсия с помощью грелки. Затем установите датчик на правой задней ноге, подключенный к компьютеризированной системе для интраоперационной проверки жизненно важных показателей.

Для перианестетической помощи нанесите стерильную офтальмологическую смазку на глаза и накройте их непрозрачной фольгированной маской, чтобы предотвратить высыхание и повреждение от хирургической лампы. Продезинфицируйте хирургическое поле повидон-йодом и задрапируйте хирургическое поле стерильным способом. Поместите микромаг с фиолетовой прокладкой под проксимальную и дистальную части аорты, чтобы лучше визуализировать артерию, как только она отделится от кавальной вены.

Затем защитите брюшко белой марлей. В день операции растворяют два микролитра ячеек-индикатора путем пипетирования в одном миллилитре PBS. Переложите смесь на одномиллилитровой шприц, снабженный канюлей.

Выключите свет в операционной. С помощью микроскопа выполняют одноточечную инъекцию в среднюю вентральную часть аорты микрощипцами, и осторожно вводят один миллилитр гепаринизированного 0,9% физиологического раствора. Осторожно введите индикатор клеток и немедленно выключите работающий микроскоп.

Снова защитите живот мокрой марлей. Дайте красителю высиживаться не менее 15 минут. Затем включите микроскоп и подсветку операционной.

Используйте микрощипцы и микроножницы для выполнения продольной артериотомии так, чтобы ее длина усредняла диаметр собранной аневризмы. Поместите аневризму рядом с аортой перед выполнением артериотомии, чтобы обеспечить правильную длину. Зашить аневризму восемью-10 одиночными швами с помощью нерассасывающегося шва 10-0.

Перед окончательным стежением доставьте катушку с плотностью упаковки один сантиметр. В этой модели может быть выполнено лечение катушкой или стентом. Затем аккуратно снимают временные зажимы, начиная дистально, под непрерывным орошением гепаринизированным физиологическим раствором.

Закройте рану послойным способом. В конце операции отмените анестезию подкожной инъекцией. Пусть каждое эксплуатируемое животное выздоровеет в чистой клетке до полного бодрствования и тепла по мере необходимости с помощью нагревательной лампы.

Объемы вытянутой исходной аневризмы за седьмой и 21-й день существенно не различались для децеллюляризованных или жизненно важных аневризм между группами лечения катушкой или стентом. Вытянутые объемы FU для децеллюляризованных аневризм показали незначительный рост аневризмы в спиральных по сравнению со стентированными аневризмами. Объем вытянутого FU был значительно больше в жизненно важной спиральной, чем в стентированной группе.

Количество клеточно-индикаторных положительных клеток в неоинтиме децеллюляризованных аневризм не существенно различалось между группами стента или спирально обработанных на седьмой день FU, но было значительно выше у стентированных крыс на 21-й день FU.No значительные различия были отмечены у крыс с витал-аневризмой, зашитых либо через семь дней, либо через 21 день, FU.In децеллюляризованные аневризмы через семь дней FU, в тромбе стента, обработанного стентом, оставалось значительно больше клеточных индикаторных положительных клеток по сравнению с группой, обработанной катушкой. Эта разница не наблюдалась при жизненно важных аневризмах на семи днях FU. Не забывайте всегда выключать свет в операционной перед инъекцией индикатора клеток, чтобы предотвратить затухание. Кроме того, дайте инкубировать краситель не менее 15 минут.