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Capitoli
- 00:04Introduction
- 00:59Assembly of the Microscopy Chamber
- 02:33Imaging Microtubule Bundles with 3‐Color TIRF
- 03:41Performing Optical Trap Experiments on Microtubule Bundles
- 06:02Results: Measuring Force Production by Kinesin‐5 and Frictional Force by PRC1
- 07:06Conclusion
Aqui, apresentamos um protocolo para reconstituir feixes de microtúbulos in vitro e quantificar diretamente as forças exercidas dentro deles usando aprisionamento óptico simultâneo e microscopia de fluorescência de reflexão interna total. Este ensaio permite a medição em nível de nanoescala das forças e deslocamentos gerados por conjuntos de proteínas dentro de redes ativas de microtúbulos.
Tags
Microtubule BundlesCytoskeletal NetworksForce MeasurementOptical TrapTIRF MicroscopySingle-molecule ExperimentsProtein ConcentrationProtein DensityMitosisNeural DevelopmentMuscle ContractionCell MigrationStreptavidinNeutrAvidinCaseinBiotinylated MicrotubulesRhodamine MicrotubulesRigor Kinesin-coated BeadsReaction Buffer
