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무세포 재구성을 위한 재조합 셉틴 복합체의 정제 및 품질 관리

JoVE Journal
Biochimica

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Purification and Quality Control of Recombinant Septin Complexes for Cell-Free Reconstitution

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무세포 재구성을 위한 재조합 셉틴 복합체의 정제 및 품질 관리

DOI:

10.3791/63871-v

•

11:50 min

•

June 23, 2022

•

Gerard Castro-Linares, Jeffrey den Haan, Francois Iv, Carla Silva Martins, Aurélie Bertin, Manos Mavrakis, Gijsje H. Koenderink

¹Department of Bionanoscience, Kavli Institute of Nanoscience Delft,Delft University of Technology, ²Institut Fresnel, CNRS UMR7249,Aix Marseille Univ, Centrale Marseille, ³Institut Curie, Université PSL,Sorbonne Université

Capitoli

00:05Introduction
00:47Purification of Septin Hetero-Oligomers
04:29Quality Control of Purity and Integrity of the Septin Hetero-Oligomer
07:34Septin Functional Quality Control via Polymerization Analysis
08:57Results: Analysis of Purified Septin Quality
11:01Conclusion

Summary

Traduzione automatica

세포골격 단백질의 체외 재구성은 이러한 단백질의 기본 기능적 특성을 이해하는 데 필수적인 도구입니다. 본 논문은 세포 분열 및 이동에 중심적인 역할을 하는 재조합 셉틴 복합체의 품질을 정제하고 평가하는 프로토콜을 설명합니다.

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Keywords: Recombinant Septin Complexes Cell-free Reconstitution Purification Quality Control Affinity Chromatography His-tagged Septins Strep-II Tagged Proteins FPLC Bacterial Expression IPTG Induction Cell Lysis Sonication Centrifugation Optical Density MsfGFP MEGFP Protein Degradation

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