Denne undersøgelse præsenterer en detaljeret procedure til udførelse af enkeltmolekyle fluorescensresonansenergioverførsel (smFRET) eksperimenter på G-proteinkoblede receptorer (GPCR'er) ved hjælp af stedsspecifik mærkning via unaturlig aminosyre (UAA) inkorporering. Protokollen giver en trinvis vejledning til smFRET-prøveforberedelse, eksperimenter og dataanalyse.