一种微创、准确、高效的小鼠胸腺内注射技术

该方案为传统的手术和盲注方法提供了一种准确、安全和有效的非手术替代方案。它也是老年或免疫缺陷小鼠萎缩胸腺最准确的注射技术。主要优点是压力最小的注射程序，非常安全和精确，而且快速，因此可以在不影响手术压力相关免疫抑制数据的情况下进行大规模实验。

保持针头和换能器的对齐，同时推进胸壁需要一些练习。因此，我们建议与经验丰富的介入放射科医生合作进行注射或提供培训。帮助演示该程序的是我实验室的技术员Shaina Anuncio。

首先，在小鼠的前胸部区域涂上一层薄薄的脱毛膏，不到一分钟以去除皮毛。用湿纸巾去除奶油和松散的皮毛。通过对后爪捏没有反应来确认适当的麻醉深度。

在双眼涂抹眼药膏以防止角膜干燥。将一只小鼠一次仰卧放在小动物超声成像站的加热平台上，鼻锥就位。在后肢和前肢用医用胶带将鼠标固定在载物台上。

使用葡萄糖酸氯己定涂抹器对无毛皮的上胸部皮肤进行消毒。激活可用的最高频率线性探头。通常，探头对于被成像的动物的大小具有最高的空间分辨率。

通过点击启动屏幕后的相应按钮来激活探头。要优化成像和注射的超声设置，请通过调整屏幕右侧的垂直方向滑块将视野深度调整为目标动物的适当大小。通过沿屏幕底部的水平条滑动按钮来调整灰度增益。

然后，将焦点区域调整到胸腺的预期水平。直立时，将约一毫升超声凝胶涂抹在换能器表面，放在超声机支架中或助手手中。要在加热平台旁边准备一个小的无菌区域，请将无菌探针盖、橡皮筋、无菌手套和无菌超声凝胶清空到无菌区域。

然后，戴上无菌手套。小心地将无菌探头盖放在超声换能器和凝胶上。为保持无菌，请仅触摸无菌盖。

将无菌橡皮筋滑过探头盖以将其固定到位。将两到三毫升无菌超声凝胶放在换能器上。将超声凝胶顶探头垂直放置在小鼠前胸壁的消毒部分进行初始成像，同时保持无菌。

如前所述，查看和优化超声图像。要在横向平面上扫描鼠标的前胸部，请垂直握住换能器，并以画笔状或扫荡的动作将其从颈部上下移动到腹部。使心脏以视野为中心，将换能器稍微向颈部扫过。

注意上胸部两侧的两个圆形成对的黑色结构。使用超声探头，定位胸腺的最宽部分，这通常是理想的注射目标部位。预测所选位置的水平针轨迹，并注意主要血管在该部位的位置。

注射过程中应避免使用这些血管。血管将是低回声脉动结构。如果不确定，请通过点击屏幕上的颜色按钮来激活彩色多普勒模式，以检查血管内的流动。

一只手握住换能器，另一只手拿着30号胰岛素针头和10微升注射液。要开始注射过程，请横向移动换能器，使胸腺在超声视野中偏离中心。确保视野的另一侧主要由超声凝胶组成，没有其他内容。

将针尖放在换能器下方的凝胶中，然后缓慢移动针头，直到在皮肤表面附近可见。在超声下连续成像针头的同时，将针头插入胸腺，经皮轨迹远离血管。使用十字胸腺水平轨迹将针尖放置在入口部位对侧的胸腺叶中。

一旦针尖进入胸腺的所需部分，在使用超声可视化的同时，快速从 30 号注射器中注入内容物。为了在针头插入和注射过程中稳定注射器，请将注射器夹在拇指和食指之间，并用食指控制注射器柱塞。将所有内容物沉积后取出针头。

在年轻小鼠中，由于腺体的体积很大，识别胸腺很简单。在老年或免疫缺陷小鼠中更具挑战性。然而，使用现代超声设备仍然非常可行。

当针头没有穿过关键结构（例如心脏、主动脉或下腔静脉之一）时，注意到成功注射。在注射过程中，针尖在其目标位置可视化，确认胸腺内沉积。使用荧光素作为荧光素酶转基因小鼠的注射剂确认注射的胸腺内位置。

这些立即通过生物发光成像进行评估，在不牺牲动物的情况下确认注射的正确位置。或者，使用离体尸检注射台盼蓝作为注射部位和注射精度的视觉标志物。我们小组一直在将这种技术用于几项大型研究，包括基于注射转基因祖细胞的癌症免疫治疗研究，以及改善免疫缺陷小鼠的胸腺功能。