In vitro kultur er en direkte deteksjonsmetode for tilstedeværelse av levende bakterier. Denne protokollen beskriver metoder for kulturen til forskjellige Borrelia spirochetes, inkludert de av Borrelia burgdorferi sensu lato kompleks, relapsing fever Borrelia arter, og Borrelia miyamotoi. Disse artene er kresne og saktevoksende, men kan dyrkes.