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使用短生物素化RNA对RNA结合蛋白进行优化的定量下拉分析
JoVE Journal
Biochimica
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Biochimica
An Optimized Quantitative Pull-Down Analysis of RNA-Binding Proteins Using Short Biotinylated RNA
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使用短生物素化RNA对RNA结合蛋白进行优化的定量下拉分析
DOI:
10.3791/64923-v
•
07:55 min
•
February 17, 2023
•
Núria Crua Asensio
,
Stefano Rizzieri
,
Alessandro Cuomo
,
Gian Gaetano Tartaglia
3
,
Elsa Zacco
1
Center for Human Technology
,
Italian Institute of Technology (IIT)
,
2
Department of Experimental Oncology
,
European Institute of Oncology (IEO)
,
3
Department of Biology and Biotechnologies ‘Charles Darwin’
,
Sapienza University of Rome
Capitoli
00:05
Introduction
00:42
Total Protein Harvest and Protein Concentration Determination
01:48
Bead Preparation
03:12
Bead Loading and Protein Binding on Beads
04:13
Washing of Nonspecific Binders
04:53
Elution of Specific Binders
05:39
Results: Quantification and Validation of Protein Interactors of Specific RNA Sequences
07:24
Conclusion
Summary
Traduzione automatica
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Türkçe (Turkish)
Traduzione automatica
在这里,我们提出了一种优化的
体外
方法,使用来自人类细胞的总蛋白质提取物、涂有生物素化RNA的链霉亲和素珠和质谱分析来发现,定量和验证特定RNA序列的蛋白质相互作用物。
Tags
Keywords: RNA-binding Proteins
Pull-down Analysis
Biotinylated RNA
Protein Complexes
HEK 293T Cells
Lysis Buffer
Magnetic Beads
Yeast TRNA
RNA Oligonucleotide
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