Rivista
/
Biochimica
/
En optimeret kvantitativ pull-down analyse af RNA-bindende proteiner ved hjælp af kort biotinyleret RNA
JoVE Journal
Biochimica
This content is Free Access.
JoVE Journal Biochimica
An Optimized Quantitative Pull-Down Analysis of RNA-Binding Proteins Using Short Biotinylated RNA

En optimeret kvantitativ pull-down analyse af RNA-bindende proteiner ved hjælp af kort biotinyleret RNA

DOI:
10.3791/64923-v

•

07:55 min

•

February 17, 2023

•

, , , ,
1Center for Human Technology,Italian Institute of Technology (IIT), 2Department of Experimental Oncology,European Institute of Oncology (IEO), 3Department of Biology and Biotechnologies ‘Charles Darwin’,Sapienza University of Rome

Capitoli

  • 00:05Introduction
  • 00:42Total Protein Harvest and Protein Concentration Determination
  • 01:48Bead Preparation
  • 03:12Bead Loading and Protein Binding on Beads
  • 04:13Washing of Nonspecific Binders
  • 04:53Elution of Specific Binders
  • 05:39Results: Quantification and Validation of Protein Interactors of Specific RNA Sequences
  • 07:24Conclusion

Summary

Traduzione automatica

Traduzione automatica

Her præsenterer vi en optimeret in vitro-metode til at afdække, kvantificere og validere proteininteraktorer af specifikke RNA-sekvenser ved hjælp af total proteinekstrakt fra humane celler, streptavidinperler belagt med biotinyleret RNA og massespektrometrianalyse.

Tags

Keywords: RNA-binding ProteinsPull-down AnalysisBiotinylated RNAProtein ComplexesHEK 293T CellsLysis BufferMagnetic BeadsYeast TRNARNA Oligonucleotide

Article

Embed

AGGIUNGI ALLA PLAYLIST

Usage Statistics

Video correlati

check_url/it/64923?article_type=v

Isolering af High-density lipoprotein for ikke-kodning Lille RNA Kvantificering
check_url/it/64923?article_type=v

En optimeret protokol for elektroforetisk mobilitet Shift Assay brug af infrarød fluorescerende farvestof-mærkede oligonukleotider
check_url/it/64923?article_type=v

En effektiv metode til isolering af stærkt Renset RNA fra Frø til brug i Kvantitative Transkriptomet Analysis
check_url/it/64923?article_type=v

Oprensning af biotinylerede celleoverfladeproteiner fra<em> Rhipicephalus microplus</em> Epitelceller
check_url/it/64923?article_type=v

Optimeret protokol til ekstraktion af proteiner fra humanmitralventilen
check_url/it/64923?article_type=v

Prøveforberedelse til massespektrometri-baseret identifikation af RNA-bindende regioner
check_url/it/64923?article_type=v

Opsamling og identifikation af RNA-bindende proteiner ved hjælp af klik kemi-assisteret RNA-interactome Capture (CARIC) strategi
check_url/it/64923?article_type=v

PeptiQuick, et et-trins inkorporering af membran proteiner i Biotinylerede Peptiskiver for strømlinede protein bindende assays
check_url/it/64923?article_type=v

Ubiquitin kædeanalyse ved parallel reaktionsovervågning
check_url/it/64923?article_type=v

Tværgående 2000 af ældre ris(Oryza sativa L.) Kerner til scanning elektronmikroskopi imaging ved hjælp af pipette tips som immobilisering Support

Read Article