一种用于评估变应性接触性皮炎的小鼠耳部模型

该模型不仅可用于探索 ACD 的发病机制，还可用于新治疗方法的临床前评估，具有重要意义。这是一种稳定且高效的动物模型，具有实验周期短、操作简便、症状明显、成功率高等诸多优点。我们的实验方案非常详细，易于操作。

务必正确遵循方案的每一步操作。在开始造模前，将小鼠置于环境中适应一周，自由摄食和饮水。在造模当天，使用紫外灯和75%酒精对环境和操作台面进行清洁和消毒。

用棉签将肥皂水涂抹于小鼠腹部，并沿毛发生长方向用刀片或剃毛器剃除毛发。称量小鼠体重，并比较各组之间的体重变化。在进行腹部敏化刺激前，需确保剃毛所致的小鼠腹部皮肤轻微损伤已完全恢复。

配制0.5% DNFB溶液，并按4:1的比例用丙酮与橄榄油的混合液进行稀释。使用移液枪吹打混合20次，充分混匀DNFB溶液。用移液器将25微升0.5% DNFB溶液滴加至腹部脱毛区域中央，再用移液器吸头的光滑面轻轻涂抹，使其均匀分散。

DNFB 刺激30秒后，将小鼠放入无垫料的空笼中，以防止小鼠蹭掉 DNFB 溶液。待溶液完全干燥后，将小鼠放回原笼，自由摄食和饮水。进行耳部致敏刺激时，应调整小鼠体位，使耳廓外缘朝下，以防止 DNFB 刺激期间溶液进入耳道。

在第4天和第10天，使用移液器将20微升的溶剂或0.2% DNFB溶液缓慢且均匀地施加至左耳耳廓内表面，并用移液器的光滑面轻轻分散溶液。右侧耳朵不做处理。待DNFB溶液完全干燥后，将小鼠放回笼中。

在腹部和耳部致敏刺激后，从第1天开始每两天称量一次小鼠体重。将每只小鼠的体重与第0天的体重进行比较，通过体重变化评估变应性接触性皮炎（ACD）对小鼠体重的影响。从第1天开始，每两天拍摄一次小鼠耳部的高分辨率照片，以记录ACD的临床症状。

使用游标卡尺每天在同一时间测量耳廓厚度，以获得准确结果。当感觉到轻微阻力时，停止游标卡尺继续向内闭合，以防止对小鼠耳朵组织造成损伤。保持测量位置固定，并记录双耳的数据。

记录三次数据的平均值，并以微米为单位评估耳部肿胀程度。为评估第11天的炎症性肿胀程度，配制0.5%伊文思蓝染料溶液，并用PBS稀释。使用固定器固定小鼠时，打开固定器盖子，抓住小鼠尾巴，使小鼠头部朝向固定器，让小鼠本能地爬入固定器中。

盖上盖子，使小鼠尾巴从盖子上的孔中穿出，并调整固定器的长度，以暴露整个小鼠尾巴。用酒精棉球反复擦拭尾巴，或将其浸入温水中30秒，然后轻轻挤压尾根部，使两侧的静脉充盈并扩张。

在冷光源照射下，使用1 mm胰岛素针头将伊文思蓝染料溶液缓慢注入小鼠尾静脉。等待15分钟后拍摄小鼠耳部图像。DNFB组小鼠耳部表现出明显的临床症状，与过敏性接触性皮炎（ACD）相似，敏感区域出现典型的红肿、干燥、糜烂和渗出症状。

然而，耳部给予纯水或溶剂对照未产生与DNFB组类似的任何症状。在DNFB组中，与未经处理的右耳相比，左耳经DNFB刺激后厚度显著增加。对照组和载体组之间无显著差异。

DNFB组小鼠在注射伊文思蓝染料后，左耳变为深蓝色，与右耳在视觉上明显不同。对照组和溶剂组小鼠的左右耳颜色大致相同。DNFB或单纯溶剂刺激使小鼠体重增长略有减缓，但并未导致显著的体重下降。

在小鼠耳部重复给予DNFB刺激导致脾脏肿大及脾脏指数升高。相比之下，溶剂对照组小鼠的脾脏指数未发生显著变化。确保DINFB溶液充分混匀，并均匀涂抹于小鼠耳部，避免流入耳道。

这是建模成功的关键。