Induction de lésions alcalines cornéennes et limbiques à l’aide d’une technique de poinçonnage-tréphine dans un modèle murin
August 4th, 2023
Ce protocole décrit une méthode permettant d’induire une lésion alcaline cornéenne et limbique précise et reproductible dans un modèle murin. Le protocole est avantageux car il permet une lésion uniformément répartie sur la cornée et le limbe de la souris, très incurvés.
Notre objectif est d’induire une lésion alcaline précise et localisée dans la cornée et la région limbique dans un modèle murin. Nous avons développé une nouvelle méthode punch-tréphine, puis étudié l’efficacité de cette méthode dans la création d’une déficience en cellules souches cornéennes et limbiques. Les techniques avancées dans le domaine du traitement de l’opacité cornéenne et de la régénération cornéenne, y compris la greffe de cellules souches limbiques, la transplantation d’exosomes et la transplantation de mitochondries, sont basées sur des études qui ont étudié les réponses cornéennes à diverses blessures ainsi que les traitements.
Par conséquent, il est essentiel de disposer d’un modèle de blessure standard, précis et fiable parmi les chercheurs. Plusieurs techniques et modèles animaux ont été utilisés pour induire diverses lésions cornéennes et étudier divers aspects du processus de cicatrisation des plaies cornéennes. Le modèle de brûlure alcaline est un modèle de blessure bien établi, qui est réalisé en appliquant de l’hydroxyde de sodium directement sur la surface de la cornée ou en utilisant du papier filtre plat.
Nous développons une nouvelle méthode de poinçonnage-tréphine pour créer un modèle murin de déficience en cellules souches limbiques de manière précise et fiable, surmonter les limites des techniques précédentes et minimiser le risque de lésion insuffisante de la région limbique ou de lésion supplémentaire du fornix et de la conjonctive. Cette technique présente plusieurs avantages. Lésion chimique efficace de toute la surface cornéenne et du limbe chez la souris, lésion localisée et bien circonscrite de la cornée, application de tout liquide pendant une durée prédéterminée, induction de lésions cornéennes de différentes tailles avec des poinçons de biopsie appropriés.
Il est également réalisable pour les modèles de blessures de rats et de lapins.
Aperçu
Ce protocole décrit une nouvelle méthode Punch-Trephine pour induire une lésion alcaline cornéenne et limbique précise et reproductible dans un modèle murin. Cette technique permet une lésion chimique efficace de toute la surface cornéenne et du limbe, facilitant les études sur la cicatrisation de la plaie cornéenne et la déficience des cellules souches.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neuroscience
- Ophtalmologie
- Médecine régénérative
Contexte
- Les lésions cornéennes peuvent entraîner une déficience visuelle importante.
- Les modèles de lésions standardisés sont cruciaux pour étudier les processus de guérison cornéenne.
- Les méthodes précédentes présentaient des limitations en termes de localisation et de cohérence des lésions.
- Le modèle de barre alcaline est une méthode bien établie pour induire des lésions cornéennes.
Objectif de l'étude
- Développer une méthode fiable pour induire des lésions cornéennes et limbiques chez la souris.
- Créer un modèle qui minimise les risques de lésions insuffisantes.
- Faciliter la recherche sur la régénération cornéenne et les stratégies de traitement.
Méthodes utilisées
- Préparation d'un poinçon de biopsie spécialisé pour l'induction de la lésion.
- Administration d'hydroxyde de sodium pour induire la lésion alcaline.
- Utilisation de PBS et de paraformaldéhyde pour la préparation chirurgicale et la fixation.
- Évaluation post-lésion en utilisant la microscopie à fente et les techniques d'imagerie.
Résultats principaux
- L'œdème cornéen a été observé de manière proéminente les jours zéro et deux après la lésion.
- La fibrose est devenue évidente pendant la deuxième semaine après la lésion.
- La migration des cellules épithéliales conjonctivales a cicatrisé le défaut épithélial en 12 à 14 jours.
- 50% des yeux lésés ont développé des défauts épithéliaux persistants à la fin de la deuxième semaine.
Conclusions
- La méthode Punch-Trephine fournit un modèle fiable pour étudier les lésions cornéennes.
- Cette technique peut être adaptée à d'autres modèles animaux tels que les rats et les lapins.
- Des recherches supplémentaires sont nécessaires pour explorer les options de traitement pour les défauts persistants.
