Genetik Olarak Kodlanmış Kalsiyum İndikatörleri Kullanılarak Virüsle Enfekte İnsan Bağırsak Organoid Tek Tabakalarının Canlı Kalsiyum Görüntülemesi
January 19th, 2024
Bu protokol, virüsle enfekte insan bağırsak organoidlerinde kalsiyum görüntüleme yapmak için bir yaklaşımı açıklar ve analize bir yaklaşım sunar.
Çalışmamızla, virüslerin bağırsak epitelinde sinyalleşmeyi nasıl bozduğunu anlamayı amaçlıyoruz. Özellikle, virüsle enfekte olmuş hücrelerin, komşu enfekte olmamış hücrelerin patogeneze katkıda bulunmak için nasıl düzensizleştiğini anlamakla ilgileniyoruz. Yakın zamanda, rotavirüs ile enfekte olmuş hücrelerin, komşu enfekte olmamış hücreleri düzensizleştiren ve viral yayılmayı kolaylaştıran ve hastalığı şiddetlendiren ADP darbeleri salgıladığını keşfettik.
Kalsiyum görüntüleme sinirbilim gibi alanlarda çok popüler olsa da, epitel biyolojisi veya virolojiyi incelemek için yaygın olarak kullanılmamıştır. Bu protokol, kalsiyum sinyalizasyonunu ve canlı virüsle enfekte epitel dokusunu incelemek için mevcut teknolojileri ve model sistemleri uyarlamak için bir yaklaşım sunar. Genetik olarak kodlanmış kalsiyum göstergelerini ifade etmek için organoidleri tasarlayarak, yaklaşımımız, insan bağırsak epitelinin hücresel çeşitliliğini özetleyen bir model sistemde tutarlı, tekrarlanabilir uzun vadeli bir görüntülemeye izin verir.
Virüs kaynaklı parakrin purinerjik sinyallemenin hem konakçı hem de virüs için etkilerini anlamayı amaçlıyoruz. Gelecekteki çalışmalarımız, bu tür sinyallerin diğer virüsler arasında geniş çapta korunup korunmadığını ve etkilerin benzer olup olmadığını da belirleyecektir.
Genel Bakış
Bu protokol, virüs enfeksiyonlu insan bağırsak organoidlerinde kalsiyum görüntüleme gerçekleştirmek için bir yaklaşımı ve analiz için bir yaklaşımı açıklar. Bağırsak epiteli içinde sinyallerin nasıl bozulduğunu anlamayı amaçlar.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Viroloji
- Epitelyal biyoloji
- Kalsiyum sinyalleşmesi
Arka Plan
- Virüsler, bağırsak epitelyal hücrelerinde sinyallemeyi bozabilir.
- Rotavirüs enfekte hücreler, komşu enfekte olmayan hücreleri etkileyerek ADP salınımı yapar.
- Epitelyal biyoloji ve virolojide kalsiyum görüntüleme yeterince kullanılmamaktadır.
- Organoidler, insan bağırsak epitelinin hücresel çeşitliliğini modelleyebilir.
Çalışmanın Amacı
- Virüs enfeksiyonlu epitelyal dokuyu incelemek için kalsiyum görüntüleme teknolojilerini uyarlamaktır.
- Viral enfeksiyonun komşu hücreler üzerindeki etkisini araştırmaktır.
- Organoidlerde uzun süreli görüntüleme için tekrarlanabilir bir yöntem sağlamaktır.
Kullanılan Yöntemler
- Genetik olarak kodlanmış kalsiyum göstergelerini ifade edecek şekilde organoidlerin mühendisliği.
- Canlı, virüs enfeksiyonlu epitelyal dokuda kalsiyum görüntüleme.
- Virüs enfeksiyonunun neden olduğu sinyal bozulmasının analizi.
- Mevcut görüntüleme teknolojilerini yeni bir bağlamda kullanma.
Ana Sonuçlar
- Rotavirüs enfekte hücrelerden ADP salınımının gösterilmesi.
- Komşu enfekte olmayan hücrelerde sinyal bozulmasının gösterilmesi.
- Organoidlerde tutarlı kalsiyum görüntüleme için bir yöntemin kurulması.
- Epitelyal biyolojide patogenez çalışmalarının potansiyelinin vurgulanması.
Sonuçlar
- Protokol, virolojide kalsiyum sinyallemesini incelemek için yeni bir yaklaşım sağlar.
- Bağırsak epiteli içinde virüs-konak etkileşimlerini anlamayı geliştirir.
- Bu yöntem, viral patogenez üzerindeki gelecekteki araştırmaları kolaylaştırabilir.
