I denne artikkelen beskrives en protokoll for manuell tyramidsignalforsterkning (TSA) multiplex immunfluorescens (mIF) kombinert med bildeanalyse og romlig analyse. Denne protokollen kan brukes med formalinfaste parafin-innebygde (FFPE) seksjoner for farging av to til seks antigener per lysbilde, avhengig av lysbildeskanneren som er tilgjengelig i laboratoriet.