Fura - 2 오전 사용하여 두피 뉴런의 칼슘 이미징
Summary
칼슘 신호는 유전자 발현, 생존과 분화 등 많은 세포 과정에 중요한 역할을한다. 여기 Fura – 2 오전 사용하여 칼슘 이미징을 수행하는 방법을 보여줍니다. 칼슘 이미징은 실시간 신호 폭포 자사의 규제에 세포 내 칼슘의 규정을 연구하기위한 귀중한 도구입니다.
Abstract
칼슘 이미징은 교양 세포의 칼슘 신호를 측정하는 데 유용합니다 일반적인 기법입니다. 칼슘 이미징 기술은 Ca2 + 이온의 바인딩에 대한 응답으로 자신의 분광 특성을 변경 BAPTA 기반 유기 분자 칼슘 지표 염료의 활용. 칼슘 표시기 염료는 두 가지 범주, Fura – 2 및 인도 1 Fluo – 4와 같은 단일 파장 염료와 같은 비율 – 통계 염료에 빠지다. 비율 – 통계 염료는 세포 내 칼슘의 농도가 서로 다른 파장의 형광 방출이나 여기의 비율에서 결정 수 있도록, 칼슘에 대한 응답으로 자신의 여기 또는 발광 스펙트럼 중 하나를 변경합니다. 단일 파장 프로브를 통해 비율 – 통계 염료를 사용하여의 주요 장점은 비율 신호가 염료 농도, 조도, 그리고 세포 내 칼슘의 농도가 독립적으로 이러한 유물을 결정 수 있도록 광학 경로 길이의 독립적이다. 가장 일반적인 칼슘 지표 중 하나는 바인딩 칼슘에 대한 응답으로 방출 505 NM에서 피크와 380 nm의 변경 사항 340 nm의 여기에서 그 피크가 Fura – 2입니다. 여기 우리는 뉴런과 다른 고르기 세포의 세포내 칼슘 고도를 측정하는 Fura – 2의 사용을 설명합니다.
Protocol
Discussion
이 프레 젠 테이션에서 우리는 AM Fura – 2를 사용하여 칼슘 이미징을 수행하는 모든 단계를 통과했습니다. 우리는 모델로 대뇌 피질의 뉴런을 사용하지만, 칼슘 이미징은 세포의 다양한 실시간으로 세포 내 칼슘을 측정하는 데 사용할 수 있습니다. 이 절차를 수행할 때 그것은 플라스틱 종종 영상이 어려운하게 자외선 파장에서 형광 있기 때문에, 대신에 플라스틱 유리 coverslips를 사용하는 것이 중요합니다. 또한, …
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| New Item | Fura-2 AM | Invitrogen | F1221 | Protect from light |
| New Item | DMSO | EM Science | MX1457-6 | Keep in dry place to prevent hydration |
| New Item | Albumin from bovine serum | Sigma | A8022-100G | Store at 4° |
| New Item | Imaging Chamber | Warner Instruments | Model RC-20H | |
| New Item | Microscope | Nikon | Eclipse TE2000-U | |
| New Item | Potassium chloride | SIGMA | P9333-500G | |
| New Item | Calibration Kit | Molecular Probes | F6774 | Protect from light |
References
- Grynkiewicz, . A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties. J. Biol. Chem. 260, 3440-3450 (1985).
- Lewis, . Mitogen-induced oscillations of cytosolic Ca2+ and transmembrane Ca2+ current in human leukemic T cells. Cell Regul. 1, 99-112 (1989).
- Dolmetsch, . Signaling between intracellular Ca2+ stores and depletion-activated Ca2+ channels generates [Ca2+]i oscillations in T lymphocytes. J Gen Physiol. 103, 365-388 (1994).
