Кальций изображений корковых нейронов использованием Фура-2 утра
Summary
Кальций сигналы играют ключевую роль во многих клеточных процессах, включая экспрессию генов, выживание и дифференцирование. Здесь показано, как выполнить кальция визуализации с использованием Фура-2 AM. Кальций изображений является ценным инструментом для изучения регуляции внутриклеточного кальция в режиме реального времени и его регуляции сигнальных каскадов.
Abstract
Кальций визуализации распространенный прием, который используется для измерения кальция сигналов в культуре клеток. Кальций методы визуализации воспользоваться кальция индикатор красители, которые BAPTA основе органических молекул, которые изменяют их спектральные свойства в ответ на связывание ионов Са2 +. Красителей кальция индикатор делятся на две категории, отношение-метрики красители, как Фура-2 и индо-1 и одной длины волны красители, как Fluo-4. Отношение-метрики красителей изменить либо их возбуждения или их спектров излучения в ответ на кальций, позволяя концентрации внутриклеточного кальция, чтобы быть определена из соотношения флуоресценции выбросов или возбуждения при различных длинах волн. Главным преимуществом использования соотношение метрике красителей по одной длине волны зондов является то, что отношение сигнал не зависит от концентрации красителя, интенсивности освещения, а длина оптического пути позволяющий концентрации внутриклеточного кальция, которые будут определены независимо от этих артефактов. Одним из наиболее общих показателей кальция Fura-2, который имеет выбросов пик при 505 нм и изменения ее возбуждения пик от 340 нм до 380 нм в ответ на кальций обязательными. Здесь мы опишем использование Фура-2 для измерения внутриклеточного кальция высот в нейронах и других возбудимых клеток.
Protocol
Discussion
В этой презентации мы прошли через все шаги для выполнения кальция визуализации с использованием Фура-2 AM. Мы использовали нейроны коры, как модель, но кальция визуализации может быть использован для измерения внутриклеточного кальция в реальном времени в различных клетках. При выполнении этой п?…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| New Item | Fura-2 AM | Invitrogen | F1221 | Protect from light |
| New Item | DMSO | EM Science | MX1457-6 | Keep in dry place to prevent hydration |
| New Item | Albumin from bovine serum | Sigma | A8022-100G | Store at 4° |
| New Item | Imaging Chamber | Warner Instruments | Model RC-20H | |
| New Item | Microscope | Nikon | Eclipse TE2000-U | |
| New Item | Potassium chloride | SIGMA | P9333-500G | |
| New Item | Calibration Kit | Molecular Probes | F6774 | Protect from light |
References
- Grynkiewicz, . A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties. J. Biol. Chem. 260, 3440-3450 (1985).
- Lewis, . Mitogen-induced oscillations of cytosolic Ca2+ and transmembrane Ca2+ current in human leukemic T cells. Cell Regul. 1, 99-112 (1989).
- Dolmetsch, . Signaling between intracellular Ca2+ stores and depletion-activated Ca2+ channels generates [Ca2+]i oscillations in T lymphocytes. J Gen Physiol. 103, 365-388 (1994).
