Kortikal nöronlar kullanarak Fura-02:00 Kalsiyum Görüntüleme
Summary
Kalsiyum sinyalleri gen ekspresyonu, hayatta kalma ve farklılaşma dahil olmak üzere pek çok hücresel süreçlerinde önemli bir rol oynamaktadır. Burada Fura-02:00 kullanarak kalsiyum görüntüleme gerçekleştirmek için nasıl göstermektedir. Kalsiyum görüntüleme, gerçek zamanlı ve sinyalizasyon kaskadlar düzenlenmesi hücre içi kalsiyum düzenlemeyi incelemek için değerli bir araçtır.
Abstract
Kalsiyum görüntüleme kültürlü hücrelerde kalsiyum sinyalleri ölçmek için kullanılan yaygın bir tekniktir. Kalsiyum görüntüleme teknikleri, Ca2 + iyonları bağlama yanıt spektral özelliklerini değiştirmek BAPTA-temelli organik molekülleri kalsiyum göstergesi boyalar, yararlanmak. Kalsiyum göstergesi boyalar, iki kategoriye Fura-2 ve Hint-1 ve Fluo-4 gibi tek bir dalga boyu boyalar gibi oran-metrik boyalar ayrılır. Oranı-metrik boyalar, hücre içi kalsiyum konsantrasyonu farklı dalga boylarında floresans emisyon veya uyarma oranının belirlenmesine olanak sağlamıştır, kalsiyum yanıt uyarma ya da kendi emisyon spektrumları değişir. Tek bir dalga boyu probları üzerinden oran-metrik boyalar kullanarak ana avantajı oranı sinyal boya konsantrasyonu, aydınlatma yoğunluğu ve hücre içi kalsiyum konsantrasyonu bu eserler bağımsız belirlenecek sağlayan optik yol uzunluğu bağımsız olmasıdır. En sık görülen kalsiyum göstergelerin biri bağlayıcı kalsiyum yanıt olarak bir emisyon 505 nM ve 380 nm 340 nm eksitasyon tepe tepe Fura-2,. İşte biz, nöronlar ve diğer Uyarılabilir hücreler hücre içi kalsiyum yükselmeler ölçmek için Fura-2 kullanımı açıklanmaktadır.
Protocol
Discussion
Bu sunumda PM Fura-2 kullanılarak kalsiyum görüntüleme gerçekleştirmek için tüm adımları geçtiniz. Biz bir model olarak kortikal nöronların kullanılan ancak kalsiyum görüntüleme, gerçek zamanlı olarak çeşitli hücrelerden oluşan bir hücre içi kalsiyum ölçmek için kullanılan olabilir. Bu işlemi yaparken plastik görüntüleme zor kılan morötesi dalga boyunda, genellikle floresan olduğundan, plastik yerine cam lamelleri kullanmak önemlidir. Ayrıca, polyornithine ve laminin lamelleri ayrılmakta hücreleri ön…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| New Item | Fura-2 AM | Invitrogen | F1221 | Protect from light |
| New Item | DMSO | EM Science | MX1457-6 | Keep in dry place to prevent hydration |
| New Item | Albumin from bovine serum | Sigma | A8022-100G | Store at 4° |
| New Item | Imaging Chamber | Warner Instruments | Model RC-20H | |
| New Item | Microscope | Nikon | Eclipse TE2000-U | |
| New Item | Potassium chloride | SIGMA | P9333-500G | |
| New Item | Calibration Kit | Molecular Probes | F6774 | Protect from light |
References
- Grynkiewicz, . A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties. J. Biol. Chem. 260, 3440-3450 (1985).
- Lewis, . Mitogen-induced oscillations of cytosolic Ca2+ and transmembrane Ca2+ current in human leukemic T cells. Cell Regul. 1, 99-112 (1989).
- Dolmetsch, . Signaling between intracellular Ca2+ stores and depletion-activated Ca2+ channels generates [Ca2+]i oscillations in T lymphocytes. J Gen Physiol. 103, 365-388 (1994).
