Dans ce protocole, nous montrer comment fabriquer et tétrodes condition pour une utilisation avec un éventail de micro-disque, qui a été conçu pour les enregistrements électrophysiologiques chroniques chez le rat. De plus, nous illustrons les étapes finales de la construction de micro-array disque, qui comprend l'installation de câbles de terre et d'un cône de protection.
Abstract
La tétrode, un faisceau de quatre électrodes, s'est avéré être un outil précieux pour l'enregistrement simultané de plusieurs neurones in vivo. L'amplitude différentielle de signatures du potentiel d'action sur les canaux d'une tétrode permet l'isolement d'une seule unité d'activité d'unités multiples signaux. La capacité de contrôler avec précision l'emplacement stéréotaxique et la profondeur de la tétrode est essentielle pour l'étude de l'activité neurale coordonnée entre les régions du cerveau. En combinaison avec une matrice de lecteur de micro-, il est possible de réaliser un placement précis et un contrôle stable des tétrodes nombreuses au cours des jours à plusieurs semaines. Dans ce protocole, nous démontrons comment fabriquer et tétrodes condition en utilisant des outils et matériaux de base, installez le tétrodes dans un tableau tétrode multi-disques pour les maladies chroniques in vivo chez le rat d'enregistrement, faire les raccordements câble de terre à la baie de micro-disque, et joignez un cône de protection sur la matrice du disque micro-afin de protéger l'tétrodes du contact physique avec l'environnement.
Protocol
1. Fabrication de tétrodes Commencer la construction d'une tétrode par l'obtention d'une longueur de 50 cm, polyimide isolés, ni chrome-fil avec un noyau 12,5 microns de diamètre. Plier le fil en demi. Passez vos doigts le long de la paire pour les faire coller ensemble. Assurez-vous que la paire de fils ont un bon contact sur toute leur longueur. Pliez à nouveau la paire en tenant les deux extrémités ensemble. Assurez-vous que la boucle formée sur une extrémité n'est pas p…
Discussion
Ce protocole est la deuxième tranche d'un protocole en deux parties: «Les micro-disque array pour les maladies chroniques in vivo d'enregistrement." La combinaison de la gamme du lecteur de micro-et la tétrode est un outil puissant pour obtenir des enregistrements simultanés de nombreux neurones dans un éveillé, comporte la préparation des animaux. J'espère que nous vous avons fourni toutes les informations nécessaires pour vous aurez besoin pour commencer ou améliorer les enregistrements éle…
Acknowledgements
Nous tenons à souligner juin Yamamoto pour son design et la construction de l'automatique, dispositif motorisé tétrode twister dépeint dans la vidéo. En outre, nous tenons à remercier tous les membres passés et présents Lab Wilson pour leur contribution à la micro-disque et le développement technologique tétrode dans le laboratoire.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Panavise
Tool
Panavise
Model 301
Holds either micro-drive array or serrated scissors
Modified Xcelite 378M Pliers
Tool
Newark
96F8903
For inserting connector board pins. To make, remove 2mm from one tip of the pliers.
Slow Cure Glue
Material
Great Planes (Champaign, IL)
GPMR6015
To glue the tetrode to the micro-drive
Gold Plating Solution
Material
Neuralynx
Sifco Selectron Gold NC
Contains gold particles for electroplating
Current Generator
Tool
World Precision Instruments
A365D-B
A.K.A. Stimulus Isolator. Used to electroplate gold solution onto electrode tips.
Impedance Meter
Tool
BAK Electronics
IMP-1 / 6662 / 2788
To check impedance of electrodes
Hot Air Gun
Tool
Steinel (Germany)
HG 3002 LCD
To fuse electrodes together to make tetrode
Accu-Tek Carbofib Tip Tweezers
Tool
Aven (Ann Arbor, MI)
18768 (Pattern 304)
For handling tetrodes
Alligator Clip
Tool
Fine Science Tools
18050-35
A.K.A. Bulldog serrefine. To clip the tetrodes together during twisting
Micro Dissecting Scissors
Tool
Biomedical Research Instruments
25-1000
For general cutting of tetrode/electrode wire
Iris Toughcut Serrated Scissors
Tool
Fine Science Tools
14058-09
For final cut of tetrodes
Teflon Coated Stainless Steel Wire
Material
A-M Systems (Carlsborg, WA)
790500
Ground wire
12.5 micron nichrome wire
Material
Kanthal Palm Coast
Rediohm-800 1/4 HARD PAC COATING
Polyimide coated micro-wire for making tetrodes.
Tetrode Twister
Tool
Neuralynx
Tetrode Assembly Station
Increases the speed and consistency of tetrode fabrication.
Silver Paint
Material
GC Electronics
22-023
For connecting the micro-electrode wires of the tetrode to the connector pins (see Discussion)
Nguyen, D. P., Layton, S. P., Hale, G., Gomperts, S. N., Davidson, T. J., Kloosterman, F., Wilson, M. A. Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly. J. Vis. Exp. (26), e1098, doi:10.3791/1098 (2009).