In diesem Protokoll zeigen wir, wie in der Herstellung und dem Zustand Tetroden für die Verwendung mit einem Mikro-Laufwerk-Array, das für die chronische elektrophysiologischen Ableitungen in Ratten entworfen wurde. Darüber hinaus zeigen wir die Endphase der Mikro-Laufwerk-Array Konstruktion, die Installation Erdungskabel und eine schützende Membran enthält.
Abstract
Die Tetrode, ein Bündel von vier Elektroden, hat sich als wertvolles Tool für die gleichzeitige Aufzeichnung mehrerer Neuronen in-vivo werden. Die differentielle Amplitude der Aktionspotentiale Signaturen über die Kanäle einer Tetrode ermöglicht die Isolierung von Single-Unit-Aktivität von Multi-Unit-Signale. Die Fähigkeit zur präzisen Steuerung der stereotaktischen Lage und Tiefe der Tetrode ist von entscheidender Bedeutung für die Untersuchung koordiniert neuronale Aktivität in Hirnregionen. In Kombination mit einem Mikro-Laufwerk-Array, ist es möglich, eine präzise Platzierung und stabile Regelung von vielen Tetroden im Laufe von Tagen bis Wochen zu erreichen. In diesem Protokoll, zeigen wir, wie in der Herstellung und dem Zustand Tetroden mit einfachen Werkzeugen und Materialien, installieren Sie die Tetroden in eine Multi-Laufwerk Tetrode Array für chronische in-vivo Aufnahme in die Ratte, machen Erdungskabel Verbindungen zu den Mikro-Laufwerk-Array, und legen einen schützenden Kegel auf der Mikro-Laufwerk-Array, um die Tetroden von physischen Kontakt mit der Umwelt zu schützen.
Protocol
1. Herstellung von Tetroden Beginnen Sie mit dem Bau eines Tetrode durch den Erwerb einer 50 cm langen, Polyimid isoliert, ni-Chrom-Draht mit einem 12,5 Mikron Durchmesser Kern. Klappen Sie den Draht in die Hälfte. Lassen Sie Ihre Finger entlang der Paar, um sie miteinander zu verkleben. Achten Sie darauf, die beiden Drähte haben einen guten Kontakt über die gesamte Länge. Falten Sie das Paar wieder, indem Sie die beiden Enden zusammen. Stellen Sie sicher, dass die Schlaufe an einem Ende gebilde…
Discussion
Dieses Protokoll ist die zweite Tranche eines zweiteiligen Protokoll: "Micro-Drive-Array für chronische in-vivo Aufnahme." Die Kombination von Mikro-Laufwerk-Array und Tetrode ist ein leistungsfähiges Werkzeug für den Erhalt von simultanen Aufnahmen von vielen Neuronen in einem wachen, verhalten Tier Vorbereitung. Hoffentlich haben wir Sie mit allen notwendigen Informationen für die Sie benötigen, um zu beginnen oder zu verbessern elektrophysiologischen Ableitungen in Ihrem eigenen Labor.
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Acknowledgements
Wir möchten bis Jun Yamamoto für seinen Entwurf und Bau von automatischen, motorisierte Tetrode twister Gerät im Video dargestellt anzuerkennen. Darüber hinaus möchten wir alle ehemaligen und derzeitigen Wilson Lab Mitgliedern für ihre Beiträge zur Mikro-Laufwerk und Tetrode Technologieentwicklung im Labor bestätigen.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Panavise
Tool
Panavise
Model 301
Holds either micro-drive array or serrated scissors
Modified Xcelite 378M Pliers
Tool
Newark
96F8903
For inserting connector board pins. To make, remove 2mm from one tip of the pliers.
Slow Cure Glue
Material
Great Planes (Champaign, IL)
GPMR6015
To glue the tetrode to the micro-drive
Gold Plating Solution
Material
Neuralynx
Sifco Selectron Gold NC
Contains gold particles for electroplating
Current Generator
Tool
World Precision Instruments
A365D-B
A.K.A. Stimulus Isolator. Used to electroplate gold solution onto electrode tips.
Impedance Meter
Tool
BAK Electronics
IMP-1 / 6662 / 2788
To check impedance of electrodes
Hot Air Gun
Tool
Steinel (Germany)
HG 3002 LCD
To fuse electrodes together to make tetrode
Accu-Tek Carbofib Tip Tweezers
Tool
Aven (Ann Arbor, MI)
18768 (Pattern 304)
For handling tetrodes
Alligator Clip
Tool
Fine Science Tools
18050-35
A.K.A. Bulldog serrefine. To clip the tetrodes together during twisting
Micro Dissecting Scissors
Tool
Biomedical Research Instruments
25-1000
For general cutting of tetrode/electrode wire
Iris Toughcut Serrated Scissors
Tool
Fine Science Tools
14058-09
For final cut of tetrodes
Teflon Coated Stainless Steel Wire
Material
A-M Systems (Carlsborg, WA)
790500
Ground wire
12.5 micron nichrome wire
Material
Kanthal Palm Coast
Rediohm-800 1/4 HARD PAC COATING
Polyimide coated micro-wire for making tetrodes.
Tetrode Twister
Tool
Neuralynx
Tetrode Assembly Station
Increases the speed and consistency of tetrode fabrication.
Silver Paint
Material
GC Electronics
22-023
For connecting the micro-electrode wires of the tetrode to the connector pins (see Discussion)
Nguyen, D. P., Layton, S. P., Hale, G., Gomperts, S. N., Davidson, T. J., Kloosterman, F., Wilson, M. A. Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly. J. Vis. Exp. (26), e1098, doi:10.3791/1098 (2009).