En este protocolo, se muestra cómo fabricar y tetrodos condición para su uso con una amplia micro-drive, que fue diseñado para la crónica registros electrofisiológicos en las ratas. Además, se ilustran las etapas finales de construcción de micro-array de unidad, que incluye la instalación de cables de tierra y un cono de protección.
Abstract
El tetrodo, un paquete de cuatro electrodos, ha demostrado ser una valiosa herramienta para la grabación simultánea de múltiples neuronas in vivo. La amplitud de la diferencia de las firmas del potencial de acción sobre los canales de un tetrodo permite el aislamiento de la actividad de una sola unidad de las señales de múltiples unidades. La capacidad de controlar con precisión la localización estereotáxica y la profundidad de la tetrodo es fundamental para el estudio de la actividad neuronal coordinada en todas las regiones del cerebro. En combinación con un array de micro-, es posible lograr una colocación precisa y un control estable de tetrodos muchos a lo largo de días o semanas. En este protocolo, se demuestra cómo fabricar y tetrodos condición usando las herramientas básicas y materiales, instalar el tetrodos en una matriz de tetrodo de varias unidades de las enfermedades crónicas en vivo la grabación en la rata, hacer conexiones cable a tierra a la matriz de micro-drive, y colocar un cono de protección en serie de la unidad de micro-con el fin de proteger a los tetrodos de contacto físico con el medio ambiente.
Protocol
1. Fabricación de tetrodos Iniciar la construcción de un tetrodo obteniendo una longitud de 50 cm, con aislamiento de poliamida, ni cromo alambre con un núcleo de 12,5 micrones de diámetro. Doble el alambre a la mitad. Corra sus dedos a lo largo de la pareja para que se peguen entre sí. Asegúrese de que el par de hilos de tener un buen contacto en toda su longitud. Veces el par de nuevo por la celebración de los dos extremos. Asegúrese de que el bucle formado en un extremo no está doblado. …
Discussion
Este protocolo es la segunda entrega de un protocolo de dos partes: "Micro-array de unidades de las enfermedades crónicas en vivo la grabación." La combinación de la matriz de la unidad de micro-y tetrodo es una poderosa herramienta para la obtención de registros simultáneos de muchas neuronas en una vigilia, comporta la preparación de los animales. Esperemos que le hemos proporcionado toda la información necesaria para que usted tendrá que iniciar o mejorar los registros electrofisiológicos en su pro…
Acknowledgements
Nos gustaría agradecer junio Yamamoto por su diseño y construcción del dispositivo automático, motor tornado tetrodo se muestra en el video. Además, nos gustaría agradecer a todos los miembros de Wilson pasado y el presente de laboratorio, por sus contribuciones a la micro-drive y el desarrollo de la tecnología tetrodo en el laboratorio.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Panavise
Tool
Panavise
Model 301
Holds either micro-drive array or serrated scissors
Modified Xcelite 378M Pliers
Tool
Newark
96F8903
For inserting connector board pins. To make, remove 2mm from one tip of the pliers.
Slow Cure Glue
Material
Great Planes (Champaign, IL)
GPMR6015
To glue the tetrode to the micro-drive
Gold Plating Solution
Material
Neuralynx
Sifco Selectron Gold NC
Contains gold particles for electroplating
Current Generator
Tool
World Precision Instruments
A365D-B
A.K.A. Stimulus Isolator. Used to electroplate gold solution onto electrode tips.
Impedance Meter
Tool
BAK Electronics
IMP-1 / 6662 / 2788
To check impedance of electrodes
Hot Air Gun
Tool
Steinel (Germany)
HG 3002 LCD
To fuse electrodes together to make tetrode
Accu-Tek Carbofib Tip Tweezers
Tool
Aven (Ann Arbor, MI)
18768 (Pattern 304)
For handling tetrodes
Alligator Clip
Tool
Fine Science Tools
18050-35
A.K.A. Bulldog serrefine. To clip the tetrodes together during twisting
Micro Dissecting Scissors
Tool
Biomedical Research Instruments
25-1000
For general cutting of tetrode/electrode wire
Iris Toughcut Serrated Scissors
Tool
Fine Science Tools
14058-09
For final cut of tetrodes
Teflon Coated Stainless Steel Wire
Material
A-M Systems (Carlsborg, WA)
790500
Ground wire
12.5 micron nichrome wire
Material
Kanthal Palm Coast
Rediohm-800 1/4 HARD PAC COATING
Polyimide coated micro-wire for making tetrodes.
Tetrode Twister
Tool
Neuralynx
Tetrode Assembly Station
Increases the speed and consistency of tetrode fabrication.
Silver Paint
Material
GC Electronics
22-023
For connecting the micro-electrode wires of the tetrode to the connector pins (see Discussion)
Nguyen, D. P., Layton, S. P., Hale, G., Gomperts, S. N., Davidson, T. J., Kloosterman, F., Wilson, M. A. Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly. J. Vis. Exp. (26), e1098, doi:10.3791/1098 (2009).