Summary

非洲爪蟾卵母细胞的微量注射

Published: February 23, 2009
doi:

Summary

在这里,我们展示了胞浆内显微注射的<em>非洲爪蟾</em>卵母细胞的核进口基材,以及准备注入卵母细胞超薄切片电子显微镜可视化。

Abstract

显微注射爪蟾卵母细胞超薄切片电子显微镜(EM)是一个优秀的系统研究核质运输。由于其庞大的核和核孔复合物(筹备)的高密度,核运输中可以很容易地在爪蟾卵母细胞的可视化。通过这个系统的使用(2006年盘特,审查)已获得很大的启示成核的进口和出口的机制。此外,我们用爪蟾卵母细胞显微注射剖析几种病毒的核进口途径,在宿主细胞核中复制。

这里我们展示了一个拥有核武器的进口基板的爪蟾卵母细胞胞浆内显微注射。我们还准备注入卵母细胞的可视化显示薄切片新兴市场,包括清扫,脱水和卵母细胞中嵌入环氧树脂嵌入树脂。最后,我们提供已显微注射的苜蓿californica nucleopolyhedrovirus杆状病毒(AcMNPV的)或小鼠(MVM)的细小分钟病毒的衣壳,并讨论该技术的潜在应用卵母细胞的代表性成果。

Protocol

第1部分:爪蟾卵母细胞显微注射的制备放置到一个50毫升锥形中的钙,免费修改巴特的生理盐水20毫升胶原酶的解决方案(5 mg / ml的胶原酶的试管一个爪蟾卵巢小片(约2厘米):88 mM的氯化钠,1 mM的氯化钾,0.82 mM的硫酸镁 ,10毫米HEPES,pH值7.5)。胶原酶用于去除环绕的卵母细胞的卵泡细胞。 摇床平台上放置管,轻轻地摇动一小时(在100 RPM)。这个时间随不同…

Discussion

薄切片新兴市场相结合的爪蟾卵母细胞显微注射是一个非常有效的工具,为研究核质运输。已使用该系统,地图,通过全国人民代表大会不同的步骤,例如与细胞质的细丝和核篮(盘特,2006年审查),如全国人民代表大会的结构组成部分的核进口基板相互作用,进口。它也被用来研究核复制病毒的核进口(盘特和卡恩,2002年, 拉贝等人,2003 ,科恩和盘特,2005年) 。

Acknowledgements

我们感谢大卫Theilmann(太平洋农业食品研究中心,Summerland,不列颠哥伦比亚省)提供杆状病毒AcMNPV的和有益的讨论。

这项工作是支持由加拿大创新基金会(CFI),加拿大卫生研究所(CIHR)健康研究(MSFHR),迈克尔史密斯基金会的机构,自然科学与工程研究理事会(NSERC),加拿大的补助金。

References

  1. Panté, N. Use of intact Xenopus oocytes in nucleocytoplasmic transport studies. Methods Mol. Biol. 322, 301-314 (2006).
  2. Panté, N., Kann, M. Nuclear pore complex is able to transport macromolecules with diameters of about 39 nm. Mol. Biol. Cell. 13 (2), 425-434 (2002).
  3. Rabe, B., Vlachou, A., Panté, N., Helenius, N., Kann, M. Nuclear import of hepatitis B virus capsids and release of the viral genome. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100 (17), 9849-9854 (2003).
  4. Cohen, S., Panté, N. Pushing the Envelope: Microinjection of MVM into Xenopus oocytes causes damage to the nuclear envelope. J. Gen. Virol. 86 (12), 3243-3252 (2005).
  5. Panté, N., Jarmolowski, A., Izaurralde, E., Sauder, U., Baschong, W., Mattaj, I. W. Visualizing nuclear export of different classes of RNA by electron microscopy. RNA. 3, 498-513 (1997).
check_url/kr/1106?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Cohen, S., Au, S., Panté, N. Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes. J. Vis. Exp. (24), e1106, doi:10.3791/1106 (2009).

View Video