높은 품질과 인간 아일 레츠의 적절한 수량을 달성하는 것은 성공적인 아일릿 이식을 위해 유명 전제 조건 중 하나입니다. 이 비디오에서는, 우리는 단계별로 설명을 인간의 췌장 아일릿 절연을위한 절차 : 수정된 자동화된 방법을 사용하여 (부분 I 소화 및 췌장 조직의 수집).
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이 논문에서
요약
초록
1 형 당뇨병의 관리는 매년 100여 억 달러를 비용, 모두 개인과 사회에, 부담합니다. 포도당 모니터링 및 새로운 인슐린 공법의 광범위한 사용에도 불구하고, 많은 사람은 여전히 파괴적인 보조 합병증을 개발합니다. 췌장 아일릿 이식은 당뇨병 환자에서 정상적인 혈당 조절 근처에 복원할 수 있습니다
프로토콜
1. 시설 설치
- 인간 아일릿 절연은 팀웍과 관련된 시간 민감한 절차이며, 따라서, 넷 개인이 절차를 수행하기 위해 필요합니다. 팀은 dissects과 췌장을 cannulates 외과 의사에 의해 리드입니다.
- 아일릿 절연은 팀이 UIC 아일릿 격리 시설을 입력하는 순간을 시작합니다. 팀 구성원은 필요한 모든 장비는 원심 분리기와 같은 검사입니다 켜져 있는지 확인하십시오. 그들은 또한 모든 후즈과 표면을 살균해야합니다.
- 두 사람은 cannulation 테이블, 슬러쉬 기계, 소화 회로, 재관류 장치, COBE 정화 기계, 및 수술 테이블을 설정합니다.
- 동시에, 다른 두 팀 구성원은 격리하는 동안 필요한 미디어를 준비합니다.
- 다음 세균학 튜브 (병, 튜브, 형태 및 가방), 샘플링 튜브 (세척 사전 가득) 및 평가 튜브와 플레이트는 준비가되어 있습니다.
- 다음과 같이 설정 정화 튜브를 준비 : 제 1 관 빈 150 ML에 표시된 튜브 2-12 인간 알부민 (세척 용액)과 보충 M199 미디어 200 ML 가득 230 ML에 표시하고, 드디어 한 50 ML 원뿔 관 세척 솔루션 50 ML 가득. 일단 이러한 준비 단계 우리가 준비하고 췌장을 perfusing 시작할 준비가 완료됩니다.
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토론
절연 결과 9,10 영향을 미치는 다양한 요소가 있습니다. 그 중에서도 췌장 조직의 소화는 현저한 역할을한다. 우리 자신의 인간 아일릿 절연 경험을 바탕으로, 우리는 잠재적으로 아일릿 수율과 품질에 영향을 미칠 수있는 중요한 포인트 아래와 요약.
- 효소의 종류가 활용되면 소화 시간이 다릅니다.
- 즉시 완전히 acinar 조직에서 분리 아일 레츠의 40~50%로 소화가 희석 솔루션을 추가하고 조직을 아래로 냉각하여 즉시 중단해야합니다.
- 조직의 부드러운 처리, 수집, 세탁, 그리고 혼합 때.
- 수집 조직 및 UW 솔루션의 조합은 더 나은 정화 결과를 얻기 위해서는 적어도 30 분 동안 얼음에 배치해야합니다.
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감사의 글
시카고 일리노이 대학뿐만 아니라 아일릿 세포 자원 센터 NIH 그랜트 (RFA - RR 05-003), 크리스토퍼 재단 Efroymson 재단과 Tellabs 재단에서 기금을 지원.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| 아이스 슬러시 머신 | 장비 | Taylor Company | K4036546 | 멸균 얼음 제조 |
| 원심분리기 | 장비 | Beckman Coulter Inc. | 424803 | |
| MZ6 도립 현미경 TLBD4.1 | 장비 | Leica Microsystems | 4103 | |
| 2 mm 그리드 세포 배양 접시 | 장비 | Nalge Nunc international | 174926 | 췌도 세포 수 측정 |
| 디지털 항온수조 EX7 | 장비 | NesLab | 105361058 | |
| 온도계 | 장비 | IBI:IR | 60444 | |
| MonoBloc 저울 AB 104-S | 장비 | Mettler Toledo | 1119430864 | 췌장 무게 측정 |
| MasterFlex II 속도 조절기 | 장비 | Cole-Parmer | J00006445 | 소화 과정 중 유속 조절 |
| 디지털 사이트 DS L1 | 장비 | Nikon Instruments | 217267 | |
| 관류 장치 | 장비 | 주문 제작 | n/a | |
| 관류 장치용 냉각기 | 장비 | Fisher Scientific | 3013P | |
| Ricordi 챔버 | 장비 | University of Miami | n/a | |
| RPMI 희석액 | 시약 | Mediatech, Inc. | 99783024 | |
| 위스콘신 대학교(UW) 용액 | 시약 | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Hank’s 완충염 용액 (HBSS) | 시약 | Mediatech, Inc. | 99-597-CM | |
| 25% 인혈청 알부민 | 시약 | GRIFOLS | NDC 61953-0002-2 | |
| M199 배지 (세척액) | 시약 | Mediatech, Inc. | 99-784-CM | |
| Collagenase NB1 GMP 등급 | 시약 | SERVA Electrophoresis | N0002937 | |
| Neutral Protease NB1 GMP 등급 | 시약 | SERVA Electrophoresis | N0002936 | |
| 베타딘 | 시약 | Cardinal Health | 29906-004 | |
| 세파졸린 | 시약 | West-Ward Pharmaceutical | NDC 0143-9924-90 | |
| 디티존 | 시약 | Sigma-Aldrich | D5130 |
참고문헌
- Shapiro, A. M., et al. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).
- Nano, R., et al.
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재인쇄 및 허가
